Question

20．某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、Bam_HI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题．

（1）在构建重组质粒时，应选用SalⅠ和HindⅢ两种限制酶对质粒和抗盐基因的DNA进行切割，然后进行连接，以保证重组DNA序列的唯一性．
（2）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加氨苄青霉素，理由是重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏．
（3）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，即通过脱分化和再分化两个主要过程最终形成完整植株．

Answer 1

分析 据图分析，该过程涉及基因工程和植物组织培养，包括获取抗盐基因，基因表达载体的构建，用农杆菌转化法将目的基因导入烟草细胞，脱分化形成愈伤组织，再分化形成转基因抗盐烟草．

解答 解：（1）质粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三种限制酶切割位点，其中BamHI的切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因；若只用SalI一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalI和HindIII两种限制酶对质粒和抗盐基因进行切割，然后进行连接，以保证重组DNA序列的唯一性．
（2）选用SalI、HindIII两种酶对质粒进行切割时，形成的重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏，为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入氨苄青霉素．
（3）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，即通过  脱分化和再分化 两个主要过程最终形成完整植株．
故答案为：
（1）SalⅠHindⅢ质粒和抗盐基因的DNA  
（2）氨苄青霉素     重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏
（3）植物组织培养     脱分化     再分化

点评 本题考查基因工程和植物组织培养的有关知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，把握各步骤中采用的方法，识记植物组织培养技术的过程，能运用所学的知识准确答题，属于考纲识记层次的考查．