利用“基因敲除”技术,能“敲除”DNA上的特定基因。该技术的主要过程示意图如下:
(1)胚胎干细胞可从小白鼠的____________________中分离得到。
(2)neoR基因插入靶基因使用的工具酶是______________和______________,前者识别特定脱氧核苷酸序列并在特定位点切开。“靶基因失活”的含义是_____________________________________________。
(3)失活靶基因与正常靶基因互换涉及的变异类型是______________;处理后的胚胎干细胞,转移到特定培养基中筛选培养。“特定培养基”中需加入__________以能起到筛选培养的目的。
(4)科学家可以通过“基因敲除”来研究基因的功能,培养图示中胚胎干细胞所获得的“基因敲除”小白鼠__________(填“能”或“不能”)直接用于研究基因功能,原因是______________________________。
⑴早期胚胎或原始性腺(2分)
⑵限制性核酸内切酶(或限制酶)(2分) DNA连接酶(2分) 靶基因中的脱氧核苷酸序列发生改变,不能表达(2分)
⑶基因重组(2分) 新霉素(2分)
⑷不能(1分) 因为该小白鼠体内仍有一个正常的靶基因,也可能表达性状(2分)
【解析】
试题分析:⑴胚胎干细胞可以从早期胚胎或原始性腺中分离得到。
⑵基因工程用到的工具酶包括限制酶和DNA连接酶;基因是控制生物性状的基本单位,当neoR基因插入靶基因后将导致靶基因的结构被破坏,失去原有的结构和功能。
⑶从图解中可以看出,失活靶基因与正常靶基因是同源互换,故两者互换片段属于基因重组;因为neoR基因是新霉素抗性基因,经处理后的胚胎干细胞获得了neoR基因,所以能在含新霉素的培养基上生存,而未经处理的胚胎干细胞在此培养基上无法生存,故“特定培养基”需加入新霉素才能起到选择作用。
⑷培养图示中胚胎干细胞所获得的“基因敲除”小白鼠不能直接用于研究基因功能,因为该小白鼠体内仍有一个正常的靶基因,也可能表达性状。
考点:本题考查基因工程的相关知识,意在考查考生能理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系,形成知识的网络结构的能力。
科目:高中生物 来源: 题型:阅读理解
基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的一门新技术。实际上是一套组合分子生物学技术,包括基因重组、细胞分离培养、转基因技术等。80年代初,胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年,Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。此后的几年中,基因敲除技术得到了进一步的发展和完善。 “基因敲除细胞”的构建过程如下:
第一步:从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞(ES),在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步:构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因(同源臂),在同源臂上接入新霉素抵抗基因等。由于同源臂与靶基因的DNA正好配对,所以能像“准星”一样, 将表达载体准确地带到靶基因的位置。
第三步:将表达载体导入胚胎干细胞,并与其内靶基因同源重组,完成胚胎干细胞的基因改造。
第四步:基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。
基本原理如下图所示。
请根据上述资料,回答下列问题:
(1)“从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞(ES),在培养基中扩增”需要利用_______________酶处理使其成为_______________,再进行细胞培养;进行培养时,培养液中除葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素外,还要加入_______________。 “基因敲除技术”以胚胎干细胞作为受体细胞是因为胚胎干细胞具有 性。
(2)在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前,应首先完成 ,在这
过程中所需要的工具酶是 。
(3)基因改造后的胚胎干细胞需要筛选,是一项的非常重要工作,原因是 。
(4)“基因基因敲除技术” 应用到DNA同源重组原理涉及的变异类型实际上是 。
(5)如果通过上图表示的过程,获得一枚“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞,并培养成一只克隆小鼠,获得的小鼠,通过有性生殖产生的后代是否都含该目的基因?为什么?
, 。
(6)上述资料中新霉素抵抗基因的作用最可能是 。
(7)科学家利用“基因敲除”技术进行研究时,对照组是_______________。由于实验动物的基因组中_______________,所以通过实验动物与正常动物性状的比较,能够发现实验动物的_______________,从而确定被敲除基因的功能。
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科目:高中生物 来源: 题型:
基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,将同源DNA片段导入受体细胞,使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段,从而达到基因敲除的目的。基因敲除既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因,也可以用正常基因敲除相应的突变基因。下列有关基因敲除说法正确的是( )
A.基因敲除实际上是删除某个基因,从而达到使该基因“沉默”的目的
B.利用基因敲除技术,不能修复细胞中的病变基因
C.基因敲除可定向改变生物体的某一基因
D.从理论上分析,利用基因敲除技术可治疗先天性愚型
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科目:高中生物 来源:2009-2010学年辽宁省本溪县高二下学期第二次月考生物试题 题型:综合题
(7分)2007年度诺贝尔生理学或医学奖获得者利用胚胎干细胞改造老鼠体内的特定基因,使实验鼠体内的一些基因失去作用,从而发现这些基因的实际功能。这项技术被称为“基因敲除”,它是用体外合成的无效基因或突变基因取代相应的正常基因,再应用转基因方法培育出转基因动物,此动物即为“基因敲除动物”,从而研究那些已经知道碱基排列顺序,而不知道其功能的基因的作用。请根据上述资料和生物学知识回答下列问题:
(1)科学家从动物胚胎中获得的组织首先要获得单个细胞,再进行细胞培养;进行培养时,培养液中要加入不同于植物组织培养的成分 (写对两种才能得分)。
(2)将体外合成的无效基因转入胚胎干细胞中有可能采用 作为运载体,由于外源DNA导入胚胎干细胞的成功率极低,因此要靠运载体上的 基因,去确定真正发生了基因重组的胚胎干细胞。
(3)科学家利用“基因敲除”技术进行研究时,对照组是 动物,通过实验动物与正常动物性状的比较,发现实验动物的 ,从而确定被敲除基因的功能。
(4)“基因靶向”是指利用细胞内的DNA可与外源性DNA同源序列发生同源重组的性质,定向改造生物某一基因的技术。下列有关叙述不正确的是
A.该过程不需要用到运载体
B.该过程是在分子水平上进行的操作
C.“基因靶向”利用基因重组的原理,定向改变生物性状
D.利用“基因靶向”技术实现DNA重组时,需要特定的酶催化
(5)如果科学家通过转基因技术,成功改造了某女性血友病患者的造血干细胞,使其凝血功能全部恢复正常,那么预测该女性与正常男性结婚后所生子女的表现型为
A.儿子、女儿全部正常 B.儿子、女儿中各一半正常
C.儿子全部患病,女儿全部正常 D.儿子全部正常,女儿全部患病
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科目:高中生物 来源:2013届江苏省高二下学期期中考试生物试卷(解析版) 题型:选择题
基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,将同源DNA片段导入受体细胞,使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段,达到基因敲除的目的。由此可推测
A.基因敲除实际上是删除某个基因,达到使该基因“沉默”的目的
B.利用基因敲除技术不能修复细胞中的病变基因
C.基因敲除可定向改变生物体的某一基因 D.基因敲除技术可治疗先天性愚型
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科目:高中生物 来源:2012届福建省高二下学期期中考试生物试卷 题型:选择题
基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,将同源DNA片段导人受体细胞,使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段,从而达到基因敲除的目的。基因敲除既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因,也可以用正常基因敲除相应的突变基因。下列有关基因敲除说法正确的是
A.基因敲除实际上是删除某个基因,从而达到使该基因“沉默”的目的
B.利用基因敲除技术,不能修复细胞中的病变基因
C.基因敲除可定向改变生物体的某一基因
D.从理论上分析,利用基因敲除技术可治疗先天愚型(21三体综合征,患者多出一条21号染色体)
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