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    8．将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力．以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表．

    表2　几种限制酶识别序列及切割位点表
    限制酶AluⅠEcoRⅠPstⅠSmaⅠ
    切割位点AG↓CT
    TC↑GA    		G↓AATTC
    CTTAA↑G    		CTGCA↓G
    G↑ACGTC    		CCC↓GGG
    GGG↑CCC
    请根据以上图表回答下列问题．
    （1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是耐高温．
    （2）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？否
    （3）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为农杆菌．
    （4）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切．假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果做出判断．
    ①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到2种DNA片段．
    ②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切得到1种DNA片段．

    分析 1、基因工程的工具：
    （1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
    （2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键．
    （3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．
    2、细胞中DNA复制与PCR技术的比较：

     细胞内DNA复制体外DNA扩增（PCR）
    不同点解旋在解旋酶作用下边解旋边复制80～100℃高温解旋，双链完全分开
    酶DNA解旋酶、DNA聚合酶TaqDNA聚合酶
    引物RNADNA、RNA
    温度体内温和条件高温
    相同点①需提供DNA模板
    ②四种脱氧核苷酸为原料
    ③子链延伸的方向都是从5'端到3'端

    解答 解：（1）PCR方法扩增目的基因的过程中，需要进行高温解链过程，因此使用的DNA聚合酶要具有耐高温的特性．
    （2）多种限制酶切割，形成不同的切割位点，所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列就没有专一性要求．
    （3）植物基因工程中，将目的基因导入受体细胞常用农杆菌转化法，因此图1步骤⑥转基因常用农杆菌做受体细胞．
    （4）据图分析，用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段产生了X、Y两个片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割质粒产生了 M、N两个片段，且M、N片段间存在Pst I酶切点．因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割这两片段形成的重组质粒，由于保留了Pstl的切割位点，所以可以得到两种DNA分子，而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒中，如图I-②过程只能产生一种DNA片段．
    故答案为：
    （1）耐高温
    （2）否
    （3）农杆菌
    （4）2      1

    点评 本题具有一定的难度，考查了运用PCR方法扩增目的基因的有关知识，意在考查考生的图解识别能力，尤其是限制酶的作用是解答本题的难点和关键点；能够识记PCR技术中DNA聚合酶耐高温的特点；识记DNA分子中C-G碱基对稳定强．

    练习册系列答案
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