Question

9．H18杂交瘤细胞产生的抗人肝癌单克隆抗体HAb18对于人体肝癌的靶向治疗具有重要的意义，但H18杂交瘤细胞在培养过程中的凋亡现象制约着细胞的高密度培养以及生产能力的提高．通过基因工程可改造H18杂交瘤细胞的抗凋亡能力，相关研究步骤如下：
①细胞培养：将人肝癌细胞在含10%小牛血清的培养液中培养．一段时间后，用胰蛋白酶处理培养液，漂洗后调整细胞悬液浓度为1×10⁷个•mL^-1．
②免疫小鼠：向小鼠体内注射肝癌细胞悬液0.8mL，以后每隔2周免疫1次，共3次，最后一次免疫后3天，取脾脏制成细胞悬液备用．
③细胞融合及筛选：将脾脏细胞悬液和骨髓瘤细胞悬液在50%PEG作用下进行融合，筛选出能产生抗人肝癌单克隆抗体HAb18的H18杂交瘤细胞．
④改造H18杂交瘤细胞：利用PCR技术获得小鼠的bcl-X_L基因（抗凋亡基因），构建表达载体，通过脂质体法导入H18杂交瘤细胞，再筛选出抗凋亡能力明显提高的H18杂交瘤细胞．请分析回答：
（1）步骤①肝癌细胞培养液中加入小牛血清的目的是补充细胞生长所需的未知营养物质，培养液中还需加入一定量抗生素的目的是防止杂菌污染．
（2）步骤②中，肝癌细胞免疫小鼠需在一定时间内间隔注射3次，其目的是加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的淋巴细胞．
（3）步骤③中，除了用50%PEG促进细胞融合外，常用的生物诱导因素是灭活的病毒．步骤④中通过脂质体法将表达载体导入H18杂交瘤细胞的原理是膜的流动性．
（4）与普通抗肝癌药物相比，用抗人肝癌单克隆抗体HAb18与相应抗癌药物结合制成的“生物导弹”治疗肝癌的主要优点是能将药物定向带到癌细胞所在部位，减少对正常细胞的伤害，减少用药剂量．
（5）乙醇有诱导细胞凋亡的作用．为了建立H18杂交瘤细胞凋亡检测模型，科研人员利用不同浓度的乙醇溶液诱导H18杂交瘤细胞凋亡，其结果如图所示．抗凋亡细胞株的建立与筛选应选择的条件是510mmol/L乙醇诱导6h（或510mmol/L乙醇诱导5h～6h）．

Answer 1

分析 分析柱形图：该实验的自变量乙醇诱导的时间及乙醇的浓度，因变量是凋亡细胞的比例，根据实验结果可知：乙醇浓度为510mmol/L，诱导6h～7h，细胞凋亡的比例最高．

解答 解：（1）步骤①肝癌细胞培养液中加入小牛血清，目的是补充细胞生长所需的未知营养物质．培养液中还需加入一定量抗生素的目的是防止杂菌污染．
（2）肝癌细胞免疫小鼠需在一定时间内间隔注射3次，其目的是增强免疫，刺激小鼠机体产生更多的淋巴细胞．
（3）步骤③中，除了用50%PEG促进细胞融合外，常用的生物诱导因素是灭活的病毒，物理诱导方法有电刺激（震荡、离心等）；步骤④中通过脂质体法将表达载体导入H18杂交瘤细胞的原理是膜的流动性．
（4）与普通抗肝癌药物相比，用抗人肝癌单克隆抗体HAb18与相应抗癌药物结合制成的“生物导弹”治疗肝癌的主要优点是：能将药物定向带到癌细胞所在部位，减少对正常细胞的伤害，减少用药剂量
（5）抗凋亡细胞株的建立与筛选应选择的条件是510mmol/L乙醇诱导6h，因为此时凋亡细胞比例最大．
故答案为：
（1）补充细胞生长所需的未知营养物质      防止杂菌污染
（2）加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的淋巴细胞
（3）灭活的病毒       膜的流动性
（4）能将药物定向带到癌细胞所在部位，减少对正常细胞的伤害，减少用药剂量
（5）510mmol/L乙醇诱导6h（或510mmol/L乙醇诱导5h～6h）

点评 本题是探究性实验，意在考查考生分析柱形图，获取实验结论的能力，对于动物细胞培养条件的识记和理解能力，难度中等．