Question

酵母菌生长的最适宜温度在20～30 ℃之间，能在pH为3～7.5的范围内生长，在氧气充足的环境中主要以出芽生殖的方式快速增殖。大约每1.5～2小时增殖一代。某研究性学习小组据此探究酵母菌种群在不同的培养液浓度和温度条件下种群密度的动态变化，进行了如下实验，实验操作步骤如下：

第一步：配制无菌马铃薯葡萄糖培养液和活化酵母菌液。

第二步：利用相同多套装置，按下表步骤操作。

装置编号	A	B	C	D
装置容器
内的溶液
无菌马铃薯葡萄糖
培养液/mL	10	10	5	5
无菌水/mL	－	－	5	5
活化酵母菌液/mL	0.1	0.1	0.1	0.1
温度(℃)	5	25	5	25

 

第三步：用血球计数板计数装置中起始酵母菌数目，做好记录。

第四步：将各装置放在其他条件相同且适宜的条件下培养。

第五步：连续7天，每天随机抽时间取样计数，做好记录。

回答下列问题：

(1)改正实验操作步骤中的一处错误________________________________________________________________________。

(2)某同学第5天在使用血球计数板计数时做法如下：

①振荡摇匀试管，取1 mL培养液并适当稀释(稀释样液的无菌水中加入了几滴台盼蓝染液)。

②先将____________放在计数室上，用吸管吸取稀释后的培养液滴于其边缘，让培养液自行渗入，多余培养液________，制作好临时装片。

③显微镜下观察计数：在观察计数时只记______(填“被”或“不被”)染成蓝色的酵母菌。

(3)如所使用的血球计数板有16个中方格，每1中方格中有25个小方格，每1个小方格容积为0.1 mm2(1 mL＝1 000 mm3)。请推导出1毫升培养液中酵母菌细胞的计算公式：酵母细胞个数/mL＝____________。

 

Answer 1

(1)第五步中应每天同一时间(定时)取样

(2)②盖玻片　用滤纸(吸水纸)吸去　③不被

(3)平均每个小方格的酵母菌数×400×104×稀释倍数

 

(1)实验中要注意遵循单一变量和对照原则，该实验中要注意在每天同一时间取样，否则由于时间不同而影响结果准确性。

(2)计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的，即16×25＝400个小方格。每一个大方格边长为1 mm，则每一大方格的面积为1 mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1 mm，所以计数室的容积为0.1 mm3。在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1 mL菌液中的总菌数。

(3)计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数。如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每1毫升菌液中所含的酵母菌个数。①16倍×25倍的血球计数板计算公式：酵母细胞数/mL＝(100个小格内酵母细胞个数/100)×400×104×稀释倍数。②25倍×16倍的血球计数板计算公式：酵母细胞数/mL＝(80小格内酵母细胞个数/80)×400×104×稀释倍数。