[题目]图1表示含有目的基因D的DNA片段长度和部分碱基序列.图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MspⅠ.BamHⅠ.MboⅠ.SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG.G↓GATCC.↓GATC.CCC↓GGG.请回答下列问题:(1)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段.其产物长度为 .(2)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换.那么� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为____________________。

（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有__________种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过__________技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因。

（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是__________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般先用添加__________的培养基进行培养，然后将生长的菌接种到只含__________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。

（4）假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BamHⅠ?__________。为什么？____________________。

【答案】 537bp、790bp、661bp 2 PCR BamHⅠ 抗生素B 抗生素A 不一定因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处不一定出现GGATCC

【解析】试题分析：根据题意，限制酶SmaⅠ的酶切位点是CCC↓GGG，完全切割图中1的DNA片段，产生平末端，在图1中有两个限制酶SmaⅠ的酶切位点，DNA将切割成3个片段，结合图解，三个片段的长度为534+3=537bp、796-3-3=790bp、658+3=661bp；构建重组质粒时，目的基因D不能限制酶MspⅠ和SmaⅠ，这两种限制酶的酶切位点在目的基因的中间，如果用其切割，目的基因D就会被破坏；也不能用限制酶MboⅠ，它的目的基因上有两个酶切位点，如果用其切割，质粒上的标记基因会被破坏，就没有办法进行重组质粒的检测，故应选用限制酶BamHⅠ。

（1）根据前面的分析可知，用限制酶SmaⅠ完全切割该DNA片段，其产物长度为537bp、790bp、661bp。

（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，基因D就突变为基因d，那么基因d上只有一个限制酶SmaⅠ切割位点，被限制酶SmaⅠ切割的产物长度为534+796-3=1327kb、658+3=661bp，因此从隐性纯合子（dd）分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有2种不同DNA片段。为了提高试验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因。

（3）结合题意，由图1可知，为了切割出完整的目的基因，由于在目的基因两侧都有GGATCC序列，而该序列可能被限制酶BamHⅠ和MboⅠ的识别并切割；再分析质粒上的GGATCC序列可知，若选用限制酶MboⅠ会将质粒中两个抗性基因（标记基因A、B）都破坏掉，所以为了便于成功筛选导入目的基因的受体细胞，只能选用只破坏一种抗性基因的限制酶，即BamHⅠ。用限制酶BamHⅠ切割质粒后，用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此首先用含有抗生素B的培养基培养大肠杆菌，能生存下来的是含有普通质粒和重组质粒的大肠杆菌；再用影印法将培养的大肠杆菌接种在含有抗生素A的培养基培养，能生存下来的是含有普通质粒的大肠杆菌，通过对比分析即可得到含重组质粒的大肠杆菌。

（4）若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，不一定能用BamHⅠ，因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处不一定出现GGATCC。

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