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    标准的PCR技术过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是

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    A．92℃、50℃、72℃
    B．72℃、50℃、92℃
    C．50℃、92℃、72℃
    D．80℃、50℃、72℃
    A
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    科目：高中生物 来源：2010年湖北省孝感高中学高一生物期末考试生物试题 题型：单选题

    （12分）PCR是聚合酶链式反应简称，可以完成特定基因的体外复制，标准的PCR过程如下图，一次循环，DNA含量就增加一倍，下图为一次循环


    （1）PCR中使双链DNA模板的形成单链DNA，需要加热，相当于在细胞内完成此过程中          的作用。
    （2）在合成互补子链过程中，一般不使用DNA聚合酶，而使用Taq酶，请你根据图解中有关信息确定最可能原因是Taq酶                   。
    （3）合成与模板互补的DNA链是以dNTP（三磷酸脱氧核糖核苷酸）为原料，若用脱氧核糖核苷酸则不能形成互补的子链，dNTP可用简略用下图解表示。
    推测：最终单个dNTP连接形成子代DNA链时，要断裂      个磷酸键，并同时为DNA链的形成提供               。
    （4）若要用PCR技术特异性地拷贝DNA分子上“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如下图1所示。经过一次循环后，产物如下图2所示。则经         轮循环后，产物中出现如下图3所示DNA分子；此DNA分子共有           个。

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    科目：高中生物 来源：2011-2012学年广东省连州市连州中学高二下学期期中考试生物试卷（带解析） 题型：综合题

    日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：

    (1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：____________________________________­­______________。
    (2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。
    (3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。
    (4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。
    ①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
    ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
    ③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
    ④表达出蓝色荧光蛋白
    （5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在                    的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到                      酶。
    (6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)   

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    科目：高中生物 来源：2013届广东省连州市高二下学期期中考试生物试卷（解析版） 题型：综合题

    日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：

     (1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：____________________________________­­______________。

    (2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。

    (3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。

    (4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。

    ①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

    ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

    ③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)

    ④表达出蓝色荧光蛋白

    （5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在                     的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到                       酶。

     (6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)   

     

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    科目：高中生物 来源：2010年湖北省高一生物期末考试生物试题 题型：选择题

    （12分 ）PCR是聚合酶链式反应简称，可以完成特定基因的体外复制，标准的PCR过程如下图，一次循环，DNA含量就增加一倍，下图为一次循环

     

     

     

     

     

     

     

     

    （1）PCR中使双链DNA模板的形成单链DNA，需要加热，相当于在细胞内完成此过程中           的作用。

    （2）在合成互补子链过程中，一般不使用DNA聚合酶， 而使用Taq酶，请你根据图解中有关信息确定最可能原因是Taq酶                    。

    （3）合成与模板互补的DNA链是以dNTP（三磷酸脱氧核糖核苷酸）为原料，若用脱氧核糖核苷酸则不能形成互补的子链，dNTP可用简略用下图解表示。

     

     

    推测：最终单个dNTP连接形成子代DNA链时，要断裂       个磷酸键，并同时为DNA链的形成提供                。

    （4）若要用PCR技术特异性地拷贝DNA分子上“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如下图1所示。经过一次循环后，产物如下图2所示。则经          轮循环后，产物中出现如下图3所示DNA分子；此DNA分子共有            个。

     

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