Question

14．基因工程获得转基因抗盐烟草的过程如图1所示，图中SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ表示三种限制酶切割位点，质粒含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．

据图回答下列问题：
（1）要得到图1中的重组质粒，先用的限制酶是SalⅠ酶，再用DNA连接酶处理．
（2）感染烟草细胞前，为确保农杆菌中含有目的基因，提高转化成功率，需进行初步筛选，过程如图2．制备培养基A时，应添加的抗生素是氨苄青霉素．筛选获得的6个菌落中，可能有些并不含有目的基因，原因是这些农杆菌含有的外源DNA是自身环化的质粒（质粒）、两两连接的质粒（至少写2种）．
（3）为判断菌落是否含有目的基因，可采用影印法，使用绒毡布压在培养基A菌落上，带出少许菌种，然后平移并印压在含有四环素的培养基B上．培养一段时间后，比较培养基A、B菌落生长情况，则可判断不含有目的基因的是1、2、3、5（填数字）菌落．
（4）烟草细胞形成愈伤组织的过程称为脱分化（或去分化），为诱导愈伤组织的形成，需要在培养基中添加一定浓度的植物激素（或生长素和细胞分裂素）．

Answer 1

分析 分析图1：图示为转基因抗盐烟草的培育过程，首先构建基因表达载体；其次采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞（烟草细胞）；再采用植物组织培养技术将含有目的基因的烟草细胞培养成转基因抗盐烟草．
分析图2：图2是筛选含有重组质粒的农杆菌的过程，培养基A和B中应该分别加入氨苄青霉素、四环素．

解答 解：（1）因为质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因都含有BamHⅠ的切割位点，用该种限制酶会使目的基因失活；目的基因上只有HindⅢ限制酶的一个切割位点，因此不符合条件，因此只能先用的限制酶是SalⅠ酶，再用DNA连接酶处理．
（2）用SalI和HindIII两种限制酶对质粒进行切割时，会破会四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的农杆菌能在含有氨苄青霉素的培养基上能生存，但不能在含有四环素培养基上生存，因此制备培养基A时，应添加氨苄青霉素．筛选获得的6个菌落中，可能有些并不含有目的基因，原因是这些农杆菌含有的外源DNA是自身环化的质粒（质粒）、两两连接的质粒．
（3）采用影印法将培养基A菌落平移并印压在含有四环素的培养基B上．图中1、2、3、5共四个菌落能生长，说明四个菌落含有四环素抗性基因，表明四环素抗性基因没有被破坏，因此不含有目的基因．
（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，愈伤组织经再分化进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加生长素和细胞分裂素．
故答案为：
（1）SalⅠDNA连接
（2）氨苄青霉素     自身环化的质粒（质粒）、两两连接的质粒
（3）1、2、3、5  
（4）脱分化（或去分化）        植物激素（或生长素和细胞分裂素）

点评 本题结合转基因抗盐烟草的培育过程图，考查基因工程、植物组织培养等知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，能根据图中限制酶的位置及题干要求选择正确的限制酶；能根据题中信息判断培养基中抗生素的名称；识记植物组织培养过程及条件．