Question

禽流感是由甲型流感病毒引起的一种禽类疾病综合征，后来引起人类流感，治疗该类流感的最好方法是注射疫苗．如图为H5N1疫苗生产过程示意图，请据图回答下列问题．
（1）要获得目的基因，首先要以合成H5N1病毒蛋白的RNA为模板合成病毒蛋白的DNA，过程①指的是

 

，过程③构建重组质粒的过程需要的工具酶是

 

．
（2）基因工程中除质粒外，

 

和

 

也可作为运载体．
（3）一般情况下，过程④首先要用

 

将大肠杆菌处理成感受态的细胞后才能作为受体细胞．
（4）为检测目的基因是否导入受体细胞，常常要借助载体上

 

的表达；要准确的方法是在含有

 

的DNA片段上用放射性同位素标记，以此探针与基因组DNA杂交．最后还要检测目的基困是否翻译成了病毒蛋白质，利用的技术是

 

．

Answer 1

考点：基因工程的应用

专题：

分析：（1）获得目的基因的方法：①从基因文库中获取  ②利用PCR技术扩增  ③人工合成（化学合成）．原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．
（2）DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
（3）目的基因的检测与鉴定，常用基因探针--用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段．Ⅰ、分子水平上的检测 ①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术Ⅱ、个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答： 解：
（1）在体外，人工以RNA为模板合成DNA的过程成为反转录．构建重组质粒时需要DNA连接酶连接目的基因和运载体的末端．
（2）常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．
（3）将目的基因导人微生物细胞时，用Ca²⁺处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合（在缓冲液中）→一定温度下，感受态细胞吸收DNA分子，完成转化．
（4）目的基因的检测与鉴定，常用基因探针--用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段．Ⅰ、分子水平上的检测  
  ①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术
  ②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术
  ③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术
Ⅱ、个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
故答案为：
（1）反转录         DNA连接酶
（2）λ噬菌体的衍生物    动植物病毒
（3）钙离子
（4）标记基因   H5N1病毒蛋白的基因     抗原-抗体杂交技术

点评：本题考查了基因工程的相关内容，意在考查考生理解所学知识的要点，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用．