Question

【题目】通过对枯草芽孢杆菌液体发酵所产生的蛋白酶活力的研究，从来源不同的10株枯草芽孢杆菌样品中筛选出1株蛋白酶活力相对较优的菌株。请回答下列问题：

（1）筛选枯草芽孢杆菌时，用无菌水将样品制成溶液并进行梯度稀释，要进行梯度稀释的理由是__________。

（2）筛选高蛋白酶活力的菌株所用的培养基中应包括 ___、葡萄糖、蛋白质等营养物质，生长因子以及___等；该固体培养基中因含有高浓度蛋白质而不透明，挑选蛋白酶活力相对较优的菌株的依据是 _________________ 。

（3）若要在-20℃条件下长期保存筛选出的优良枯草芽孢杆菌，则菌液中常需要加入一定量的____（填“蒸馏水”“甘油”或“蛋白质”）。

（4）蛋白酶的活力可用_________ 来表示。

（5）利用枯草芽孢杆菌进行液体发酵时，常用摇床进行振荡培养，据此推测枯草芽孢杆菌的细胞呼吸类型是 ___________________ 。

Answer 1

【答案】样品制成的溶液中该菌的浓度高，直接培养很难分离得到单个菌落 水、无机盐 琼脂 菌落周围的透明圈较大 甘油 一定条件下，蛋白酶催化蛋白质分解反应的速率 需氧型（或有氧呼吸）

【解析】

1．培养基的成分：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等。

2．菌种保存

	临时保存法	甘油管藏法
适用对象	频繁使用的菌种	长期保存的菌种
培养及类型	固体斜面培养基	液体培养基
温度	4℃	-20℃
方法	菌落长成后于冰箱中保存，每3～6个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上	将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存
缺点	菌种易被污染或产生变异	\\

（1）样品制成的溶液中该菌的浓度高，直接培养很难分离得到单个菌落，因此需要进行梯度稀释。

（2）微生物的选择培养基常用固体培养基，因此需要加人凝固剂——琼脂，培养基中的营养成分应包括水、无机盐、碳源、氮源等，固体培养基中因含有高浓度蛋白质而不透明，挑选蛋白酶活力相对较优的菌株的依据课通过菌落周围的透明圈较大为依据筛选。

（3）长期保藏菌种常用甘油管藏法，即向培养液中加入一定量的甘油，然后再将混合液放到20℃的冷冻箱中。

（4）酶活力常用一定条件下，蛋白酶催化蛋白质分解反应的速率来表示。

（5）进行液体发酵时用摇床进行振荡培养，有利于混匀使微生物充分利用营养物质，并利于增氧，据此推测枯草芽孢杆菌的细胞呼吸类型是需氧型。