Question

12．EPO是促红细胞生成素（Erythropoietin）的英文简称，是一种激素样物质，可促进体内新红细胞生成．人类已可通过基因工程合成EPO基因，并采用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达系统来获取产物．其过程如下：

请回答下列问题：
（1）从人体组织中提取EPO的mRNA，通过逆转录得到cDNA，再通过PCR技术获得大量EPO基因．
（2）供体母鼠通常情况下每次排卵8～12枚，为使其超数排卵，需注射促性腺激素以排出更多的卵子，培养到减数第二次分裂中期时期与获能的精子相遇时，精子首先发生顶体反应，穿越放射冠和透明带，完成体外受精．
（3）①过程构成了基因表达载体，内部包括不可缺少的组成部分，其中启动子能驱动基因的转录．
（4）采用显微注射技术技术，将重组表达载体导入小鼠受精卵中，将受精卵移入发育培养液中继续培养．培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清（血浆）等物质．
（5）当胚胎发育至桑椹胚或囊胚时期，向受体移植，为获得更多个转基因胚胎，要将内细胞团均等切割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．
（6）若想检验转基因仓鼠是否成功表达EPO，可以采用抗原抗体杂交技术对血液来进行检测．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）获取目的基因的方法可通过反转录法，故从人体组织中提取EPO的mRNA，通过逆转录得到cDNA，再通过PCR技术获得大量EPO基因．
（2）为使供体母鼠超数排卵，需注射促性腺激素以排出更多的卵子，卵子需培养到减数第二次分裂中期时才能与获能的精子相遇时，精子首先发生顶体反应，穿越放射冠和透明带，完成体外受精．
（3）①过程为形成基因表达载体的过程，基因表达载体包括启动子、终止子等，其中启动子为RNA聚合酶结合的部位，能驱动基因的转录．
（4）将重组表达载体导入动物细胞中常采用显微注射技术技术．动物细胞培养的培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清（血浆）等物质．
（5）胚胎移植时一般在桑椹胚或囊胚时期，为获得更多转基因胚胎，要将囊胚的内细胞团均等切割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．
（6）检测蛋白质的是否合成可通过抗原抗体杂交法，故若想检验转基因仓鼠是否成功表达EPO，可以采用抗原抗体杂交技术对血液来进行检测．
故答案为：
（1）cDNA
（2）促性腺    减数第二次分裂中期     顶体 
（3）启动子 
（4）显微注射技术   维生素
（5）桑椹胚或囊胚  内细胞团   性别鉴定
（6）抗原抗体杂交

点评 本题以“促红细胞生成素”的合成为题材，考查基因工程和植物细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，识记植物组织培养的原理及应用，能结合题中信息准确答题．