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    分离自生固氮菌时，下列各操作中，错误的一项是

    [　　]

    A．使用无氮培养基

    B．在37℃恒温箱中培养

    C．在28～30℃条件下培养

    D．无氮培养基应选用没有其它微生物的

    答案：B
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    科目：高中生物 来源：讲与练·高三生物 题型：013

    分离自生固氮菌时，下列各操作中，错误的一项是

    [　　]

    A．使用无氮培养基

    B．在37℃恒温箱中培养

    C．在28～30℃条件下培养

    D．无氮培养基应选用没有其它微生物的

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    科目：高中生物 来源：2011-2012学年安徽宿松复兴中学高二下学期第三次月考生物试卷（带解析） 题型：综合题

    （10分）圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
    （1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
    ①分别配置               的培养基和            的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
    ②分别向A、B培养基接种            ；
    ③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
    ④从A、B培养基上生长的      中挑取生长良好的菌株，分别接种到       中；
    ⑤                                 。
    （2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。

    反应条件
     
    		温度
    		时间
    变 性
    		95℃
    		30s
    复 性
    		55℃
    		30s
    延 伸
    		72℃
    		1min
    30个循环后
    		适宜
    		5-10min
    保 温
    		4℃
    		2h
     
    PCR反应体系
    		50ul
    缓冲液
    		5ul
    脱氧核苷酸
    		1ul
    引物A      
    		0.5ul
    引物B      
    		0.5ul
    DNA聚合酶   
    		0.5U
    模板DNA     
    		1-2ul
    加去离子水补足至50 ul
    ①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是              。
    此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________          ________________。

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    科目：高中生物 来源：上海市部分重点中学2010届高三第二次联考生物试卷 题型：综合题

    （9分）请回答下列有关微生物的问题。
    （1）在微生物分离、鉴定实验中，通常在配置固体培养基时需在培养基中加入      ___（物质）。
    （2）采用固体平板培养细菌时，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿       ____培养。
    （3）下表为探究抗生素对微生物抑制作用的实验处理。先将大肠杆菌接种于培养基上，然后将培养皿置于37℃条件下培养2~3天，观察、测量并记录           _______________情况。如果实验所用抗生素的浓度关系为A< C < B，则编号1、2、3、4的抑菌效果从大到小依次为      __________________________________。

    编号
    		1
    		2
    		3
    		4

    圆纸片

     
    实验处理

    		圆纸片浸在
    浓度A抗生素
    		浓度B抗生素
    		浓度C抗生素
    		蒸馏水





    （4）现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序， 于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响结果如下表所示。

    根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是                              。
    （5）某同学在做微生物实验时，不小心把自生固氮菌和酵母菌混在一起，请你帮助该同学完善实验步骤，将自生固氮菌和酵母菌分离开来：
    ①制备两种培养基，对两种培养基的处理方式分别是：一种是                   ，另一种是                   ，将两种培养基各自分成两份，依次标上A，a和B，b。
    ②分别向A、B培养基中接种             菌，适宜条件下培养3-4天。
    ③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a和b培养基中，适宜条件下培养3-4天。其目的是                                            。

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    科目：高中生物 来源：同步题 题型：探究题

    探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。
    实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。
    材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干。无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。
    方法步骤：
    (1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在___________操作。
    (2)制备土壤稀释液。取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液1mL，转至9mL无菌水的大试管中，依次稀释到107倍稀释度。为实现无菌操作，试管口和移液管应在离火焰____cm处。
    (3)涂布。按照由107~103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布____个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布____个平板。
    (4)培养。放入恒温箱内，在适宜温度条件下培养3d～4d。一般每隔____小时统计一次，选取____时的记录作为结果，这样可以防止____。
    (5)细菌的计数。当菌落数目稳定时，选取菌落数在___________的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是___________。(稀释度是105)
    (6)预期结果。相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数____(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。理由是______________。

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