Question

【题目】我国科学家张道远先生通过从耐旱灌木白花柽柳中克隆得到TSOD基因，利用转基因技术转化到棉花中，获得了具备更强抗旱性的T4代转基因棉花株系．下图为转基因抗旱棉花的培育过程示意图，请据图回答下列问题：
（1）①过程表示用扩增目的基因，该过程使用到的酶是 ．
（2）步骤③一般用处理农杆菌，使其易吸收周围环境中的DNA分子．除图中所示的农杆菌转化法外，还可采用方法将基因导入植物细胞．
（3）外植体培养成为试管苗的过程采用了技术，利用了的原理，步骤⑤⑥表示、 ．
（4）用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．若利用该片段构建基因表达载体，应选用图中的何种Ti质粒？
（5）为了确定抗旱转基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素标记的作探针进行分子水平鉴定，再进行个体水平鉴定棉花植株的抗旱性．

Answer 1

【答案】
（1）PCR技术；热稳定DNA聚合酶
（2）Ca2+（或CaCl2）；花粉管通道法（基因枪法）
（3）植物组织培养；植物细胞的全能性；脱分化；再分化
（4）甲
（5）抗旱基因（TSOD基因、目的基因）；移栽到干旱土地中
【解析】解：（1）①过程表示用PCR技术扩增目的基因，PCR技术中利用高温解链，因此不需要解旋酶，但是需要热稳定性的DNA聚合酶．（2）步骤③中将重组质粒导入农杆菌，一般用Ca2+处理农杆菌，使其变为感受态，易吸收周围环境中的DNA分子．将目的基因导入植物细胞有农杆菌转化法、基因枪法等．（3）外植体培养成为试管苗常采用植物组织培养技术，该技术能够体现植物细胞的全能性的，步骤⑤⑥分别表示脱分化、再分化．（4）用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．甲、该Ti质粒中含有限制酶XbaI和SacI的切割位点，且用这两种酶切割可将目的基因插入T﹣DNA中，甲正确；乙、该Ti质粒中不含限制酶SacI的切割位点，乙错误；丙、该Ti质粒中含有限制酶XbaI和SacI的切割位点，但用这两种酶切割不会将目的基因插入T﹣DNA中，丙错误；丁、该Ti质粒中不含限制酶XbaI的切割位点，丁错误．故选：甲．（5）为了确定抗旱转基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素标记的抗旱基因（TSOD基因、目的基因）作探针进行分子水平鉴定，再移栽到干旱土地中进行个体水平鉴定棉花植株的抗旱性． 所以答案是：（1）PCR技术 热稳定DNA聚合酶（2）Ca2+（或CaCl2） 花粉管通道法（基因枪法）（3）植物组织培养 植物细胞的全能性 脱分化 再分化（4）甲（5）抗旱基因（TSOD基因、目的基因） 移栽到干旱土地中
【考点精析】利用基因工程的原理及技术对题目进行判断即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重组技术．