Question

【题目】支原体是一种严重危害牛养殖业的病原体，在全球各地域广泛分布，能够造成肺炎、乳腺炎、耳炎、角膜结膜炎、关节炎等多种疾病，还能导致母牛流产与不孕，且发病率很高。研究表明，VspX蛋白是支原体表面的一种蛋白，科研人员通过制备抗VspX蛋白单克隆抗体来进行相关研究。请回答下列问题：

（1）将等量的纯化VspX蛋白分别注射到5组生长状况相同的小鼠体内，经过二次免疫后，测定小鼠抗VspX抗似的免疫效果，根据免疫效果，取__________组小鼠用于后面的融合实验。

（2）在融合实验开始前三天，对该组小鼠再次注射VspX蛋白，目的是____________________。

（3）从小鼠的脾脏中获取相应细胞与_______________融合，用选择培养基进行筛选。

（4）一段时间后，将筛选得到的杂交瘤细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测。

（5）将阳性反应强的细胞经__________酶处理，制成细胞悬液，并置于__________（装置）中进行扩大培养。该装置中的作用是________________________________________。

（6）提取抗VspX单克隆抗体与不同抗原进行杂交检测，结果如图，该结果表明，抗VspX单克隆抗体的特点是_____________________。

Answer 1

【答案】免疫效果最好的 刺激机体产生更多的浆细胞 骨髓瘤细胞 胰蛋白 二氧化碳 培养箱维持培养液的pH值 灵敏度高，特异性强

【解析】

单克隆抗体的制备：

（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。

（2）获得杂交瘤细胞

①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；

②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。

（3）克隆化培养和抗体检测；

（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖；

（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取；

（6）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，能大量制备。

（1）VspX蛋白作为抗原注射到小鼠体内，使小鼠产生特异性免疫应答。要选取免疫效果最强的组别用于后续融合实验。

（2）为了使刺激机体产生更多的浆细胞，对该组小鼠再次注射抗原，加强免疫。

（3）用PEG（聚乙二醇）使小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，再通过选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。

（5）加入胰蛋白酶使细胞分散开，制成细胞悬液，培养动物细胞时，要置于二氧化碳培养箱中，该装置中的CO2是为了维持培养液的pH值。

（6）实验结果表明，抗VspX单克隆抗体与1、2结合明显，不能与3、4结合，具有很强的灵敏度和特异性。