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【题目】下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,左图、右图中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题:

限制酶

BamH Ⅰ

BcI

Sau3A

Hind

识别序列及切割位点

G GATCC

CCTAG G

T GATCA

ACTAG T

GATC

CTAG

A AGCTT

TTCGA A

1)根据表中的酶切位点,Sau3A I在质粒上有________个酶切位点。用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用__________________两种限制酶切割。

2)若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接,对于该部位,________________

A.BamH I酶和Bcl I酶都能切开 B.BamH I酶和Bcl I酶都不能切开

C.BamH I酶能切开,Bcl I酶不能切 D.BamH I酶不能切开,Bcl I酶能切开

3)酶切后的载体和目的基因片段,通过_________酶作用后获得重组质粒。为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加_____________,平板上长出的菌落。

4)在一个典型的基因内部,转录起始位点(TSS)、转录终止位点(TTS)、起始密码子编码序列(ATG)、终止密码子编码序列(TGA)的排列顺序是____________

A.ATGTGATSSTTS B.TSSATGTGATTS

C.ATGTSSTTSTGA D.TSSTTSATGTGA

【答案】3 BclIHind B DNA连接酶 四环素 B

【解析】

分析题图:左图质粒上,四环素抗性基因有BamH Ⅰ酶切割位点,氨苄青霉素抗性基因上有BcIⅠ酶、BamH Ⅰ酶、HindⅢ酶切割位点;目的基因两端有BamH BcIⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ酶的切割位点。分析表格,BamH BcIⅠ、Sau3AⅠ三种酶切割的粘性末端相同。

1)根据表格分析可知,Sau3A I在质粒上有3个酶切位点。选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点,但BamH在质粒上有两个切割位点,会使质粒中的启动子丢失,因此只能选BcIⅠ和HindⅢ酶。

2BamH I酶和Bcl I酶切割产生的粘性末端相同,但两种酶识别的序列不同,所以若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接后,形成的DNA序列两种酶都不能识别。

3)酶切后的载体和目的基因片段,通过DNA连接酶作用后获得重组质粒。由于重组质粒中氨苄青霉素抗性基因被破坏,所以为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加四环素。

4)已知基因的结构包括编码区和非编码区,在编码区的上游有启动子,其上含有转录起始位点(TSS)、在编码区先有起始密码子编码序列(ATG),最后有终止密码子编码序列(TGA)、在非编码区的下游有终止子,其上含有转录终止位点(TTS),所以在一个典型的基因内部,以上四种序列的排列顺序是TSS-ATG-TGA-TTS

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