Question

14．约翰•伯特兰•戈登和山中伸弥因在“体细胞重编程技术”领域做出革命性贡献而获得诺贝尔生理学或医学奖．请回答下列问题：
（1）1962年约翰•伯特兰•戈登通过实验把蝌蚪肠上皮细胞的细胞核移植进入去核的卵细胞中，成功培育出“克隆青蛙”．因动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐降低，但此实验说明已高度分化的动物体细胞的细胞核仍具有发育全能性．更多的实验证明，到目前还不能用类似植物组织培养技术（克隆植物的方法）获得克隆动物．
（2）所谓“体细胞重编程技术”是将体细胞重新诱导回早期干细胞状态，即获得诱导性多能干（iPS）细胞．山中伸弥把4个关键基因转让小鼠的成纤维细胞，并整合到染色体的DNA上，使其转变成iPS细胞；为确定基因是否进入成纤维细胞可用DNA分子杂交技术检测．
（3）在研究中可通过动物细胞培养技术获取大量iPS细胞，该过程一般需先加入胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理一段时间，分散成单个细胞，然后分瓶继续培养；另外，iPS细胞还需置于二氧化碳培养箱中培养的目的是维持培养液pH值（相对稳定）．

Answer 1

分析 1、细胞分化程度越高，全能性越低；由于动物体细胞全能性受限制，因而直到今天也还不能用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体；通过克隆技术获得的动物实际上是通过核移植实现的．
2、外源基因进入受体细胞得通过构建基因表达的载体来实现．构建基因表达的载体除了目的基因外还需要载体、工具酶．通过基因表达载体的协助，最终可使外援基因整合到受体细胞的染色体DNA上．

解答 解：（1）动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖．根据题意分析可知：由于动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，所以不能用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体；培育的“克隆青蛙”，实际是通过核移植来实现的，表明动物细胞的细胞核具有全能性．
（2）在基因工程中常用的运载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．所以逆转录病毒是基因进入成纤维细胞的载体，并整合到其染色体DNA上．为确定基因是否进入成纤维细胞可用DNA分子杂交技术检测．
（3）获取大量iPS细胞可通过动物细胞培养技术，该过程一般需先加入胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理一段时间，分散成单个细胞，然后分瓶继续培养．二氧化碳培养箱中培养的目的是维持培养液pH值．
故答案为：
（1）降低   细胞核   植物组织培养
（2）DNA    DNA分子杂交
（3）动物细胞培养    胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）    维持培养液pH值（相对稳定）

点评 本题考查动物细胞培养、基因工程、细胞分化等相关知识，意在考查学生识记和理解能力，难度不大．