Question

下图为绿色荧光小鼠制备流程图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：

（1）构建表达载体需要的酶是：                         ，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、           、        、终止子和复制原点等。
（2）图中载体上的NEO基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418 是一种抗生素（对细胞有毒害作用），添加G418的目的是_                                  。
（3）图中所用的胚胎干细胞来自于               。
（4）图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的           位置，图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素进行               处理。
（5）可以使用         方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。

Answer 1

⑴限制性核酸内切酶和DNA连接酶  标记基因  启动子
⑵筛选出导入目的基因的胚胎干细胞
⑶早期胚胎或原始性腺  ⑷内细胞团  同期发情处理  ⑸抗原-抗体杂交（1分）

解析试题分析：（1）构建表达载体需要的酶是：限制性核酸内切酶和DNA连接酶，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、标记基因、启动子、终止子和复制原点等。
（2）图中载体上的NEO基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418是一种抗生素（对细胞有毒害作用），添加G418的目的是筛选出导入目的基因的胚胎干细胞。
（3）图中所用的胚胎干细胞来自于早期胚胎或原始性腺。
（4）图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的内细胞团位置，图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素进行同期发情处理处理。
（5）可以使用抗原-抗体杂交方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。
考点：本题考查基因工程和胚胎工程，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构。