Question

【题目】欲研究细胞在培养瓶中培养适当时间后，产生的细胞总数、集落数与原培养细胞浓度的关系（集落是指贴壁生长的细胞增殖6代以上形成的细胞群体，肉眼可见），请完善实验思路，预测实验结果并进行分析与讨论。

村料与用具：未知浓度的X细胞悬液，动物细胞培养液，培养瓶若干，C02培养箱，血细胞计数板，显微镜，移液器，胰蛋白酶，染色剂等。

（要求与说明:细胞和集落计数、染色等具体过程不作要求，所用试剂的剂量不作要求，营养均满足要求，各种条件适宜）

（1）完善实验思路：

①____________________；

②据思路①，用动物细胞培养液稀释获得1000个/5mL、800个/5mL、600个/5mL、400个/5mL、200个/5mL、100个/5mL6种浓度的X细胞悬液；

③分别取5mL上述配制的6种浓度的X细胞悬液加到培养瓶中，每种浓度设若干重复样品，放入CO2培养箱中培养3周后，去除培养液并染色；

④____________________；

⑤____________________；

⑥____________________。

（2）预测实验结果：

若已知200个/5mL至800个/5mL浓度间，产生的集落数与原培养细胞浓度呈线性关系，但低于200个/5mL或高于800个/5mL的浓度将会偏离，请建立一个坐标系并画出集落数与原培养细胞浓度关系曲线。

（3）分析与讨论：

①高于800个/5mL的浓度会偏离线性关系的原因是_________________。

②低于200个/5mL会偏离线性关系的原因是___________，欲解决这种情况，可预先在培养瓶中制备一层_________细胞，以支持生长来提高效率。

Answer 1

【答案】 ①用血细胞计数板和显微镜对X细胞悬液计数，确定其浓度 对每个培养瓶的集落进行计数，记录数据（并取平均值） 各培养瓶（或另取培养瓶）用胰蛋白酶液处理（集落）并稀释，再用血细胞计数板和显微镜计数 对所得数据进行统计和处理 多个细胞共同形成集落/集落有重叠 浓度太低，有些细胞死亡/不能存活/不能贴壁，不能培养形成集落 滋养/饲养层/(胚胎）成纤维

【解析】试题分析：本题主要围绕实验考查动物细胞培养。要求学生熟知实验过程的描述、自变量与无关变量的设置，以及因变量的测量。

（1）①本实验欲研究细胞在培养瓶中培养适当时间后，产生的细胞总数、集落数与原培养细胞浓度的关系，因此实验前，须测量原培养液细胞浓度，测量的方式采用血细胞计数板和显微镜

④培养完后，需对每个培养瓶的集落进行计数，记录数据（并取平均值）

⑤集落是指贴壁生长的细胞增殖6代以上形成的细胞群体，所以测量细胞数，还需要将各培养瓶（或另取培养瓶）用胰蛋白酶液处理（集落）并稀释，再用血细胞计数板和显微镜计数

⑥最后对所得数据进行统计和处理

（2）描述的是产生的集落数与原培养细胞浓度的关系，因此曲线图横坐标为浓度，纵坐标为集落数。图中必须描述出低于200个/5mL或高于800个/5mL的浓度将会偏离正常曲线，因此曲线图为

（3）①高于800个/5mL的浓度会偏离线性关系的原因是集落有重叠。

②低于200个/5mL会偏离线性关系的原因是浓度太低，有些细胞死亡，欲解决这种情况，可预先在培养瓶中制备一层滋养细胞，以支持生长来提高效率。