Question

【题目】环保人员发现，工业污水中有一种极难降解的含氮有机物NS（无色的NS与碘作用可形成蓝色反应），但可被NS分解菌高效降解。请分析回答下列问题：

（1）欲得到能高效降解NS分解菌，可以选择__________的环境采集样品分离所需细菌，在筛选NS分解菌的过程中，以__________为唯一氮源，该培养基属于__________培养基，若要对NS分解菌加以纯化并计数，可采用的接种方法是__________。

（2）实验室采用此方法，将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接人0.1mL稀释液；经正确操作培养后，3个平板上的菌落数分别为150、158和145。据此可得出毎升样品中的活菌数__________（填“至多”或“至少”）为__________个。

（3）为排除杂菌污染，应设置的对照实验是__________。

（4）欲鉴定筛选得到的NS分解菌是否具有实用价值，在培养NS分解菌的培养基中除了加入必需营养物质外还需要加入__________用于颜色反应鉴别NS分解菌。若用上述培养基比较不同菌株NS降解能力的大小，请将实验设计思路补充完整：用含有__________培养不同菌株，一定时间后，通过测定_________来确定不同菌株降解NS能力的大小。

Answer 1

【答案】被工业污水污染的水体 含氮有机物（NS）选择稀释余布平板法至少1.51×108不接种的空白培养基碘液相同NS浓度的上述培养基菌落周围透明圈的大小（或“直径”）

【解析】

分离菌株的思路：(1)自然界中目的菌株的筛选；①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。(2)实验室中目的菌株的筛选①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。统计菌落数目的方法：(1)稀释涂布平板法（间接），①当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。 (2)利用显微镜直接计数。

（1）筛选相应的菌株应该到其生存环境去寻找，由于工业污水中有一种极难降解的含氮有机物NS，但可被NS分解菌高效降解，因此欲得到能高效降解NS分解菌，可以选择被工业污水污染的水体的环境采集样品分离所需细菌，据题意可知，NS分解菌高效降解含氮有机物NS，因此筛选NS分解菌的过程中，以含氮有机物（NS）为唯一氮源，该培养基属于选择培养基，若要对NS分解菌加以纯化并计数，可采用的接种方法是稀释余布平板法。

（2）将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接人0.1mL稀释液；经正确操作培养后，3个平板上的菌落数分别为150、158和145。由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，据此可得出毎升样品中的活菌数至少为（150+158+145）÷3÷0.1×100×1000=1.51×108 个。

（3）为排除杂菌污染，应设置的对照实验是不接种的空白培养基。

（4）由于无色的NS与碘作用可形成蓝色反应，因此在培养NS分解菌的培养基中除了加入必需营养物质外，还需要加入碘液用于颜色反应鉴别NS分解菌。若用上述培养基比较不同菌株NS降解能力的大小，可用含相同NS浓度的上述培养基，培养不同菌株，一定时间后，通过测定菌落周围透明圈的大小（或“直径”） 来确定不同菌株降解NS能力的大小。