Question

7．为了调查某城市自来水的水质情况，某研究小组对自来水水样中的大肠杆菌含量进行了测定，请回答下列问题：
（1）检测自来水中大肠杆菌的数量，可选用伊红美蓝培养基，伊红美蓝培养基除了为大肠杆菌的生长繁殖提供水和碳源外，还可以提供氮源和无机盐等基本营养成分．该研究小组在统计菌落数目时，选取菌落数目未定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而遗漏菌落的数目．
（2）在接种前，该研究小组随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，结果发现空白对照组的平板上出现了6个菌落，请分析说明可能的原因（写出两点）：①培养基灭菌不合格；②倒平板过程被污染（或培养皿灭菌不合格）．若空白平板上无菌落出现，其他三组实验组平板上菌落平均数为33-35个，这些平板需要在37℃温度下，pH调至中性或微碱性的条件下培养1-2d．
（3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，每次划线之前都要对接种环进行灭菌目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种．在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是将聚集的菌体逐步进行稀释，以获得单个菌落；划线时落在培养基上共画了5个区域，则需要6次灼烧接种环．
（4）直接给牲口饮用自来水或河水，牲口易出现腹泻．在饮水中加土霉素可预防牲口出现大面积腹泻，但长期大量使用土霉素容易引起大肠杆菌产生抗药性，这一过程的实质是大肠杆菌种群的抗药性基因频率发生了变化．

Answer 1

分析 微生物接种常用的两种方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落

解答 解：（1）微生物培养基成分应包括水、无机盐、碳源、氮源等．
（2）为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成．
（3）接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落．每次划线之前及接种之后都要对接种环进行灭菌，因而划5个区域，则需要6次灼烧接种环．
（4）长期大量使用土霉素容易引起大肠杆菌产生抗药性，这是人工选择的结果，实质是大肠杆菌种群的抗药性基因频率发生了变化．
故答案为：
（1）氮源和无机盐     培养时间不足
（2）培养基灭菌不合格   倒平板过程被污染（或培养皿灭菌不合格）   中性或微碱性
（3）杀死上次划线后接种环上残留的菌种将聚集的菌体逐步进行稀释，以获得单个菌落    6
（4）抗药性基因频率

点评 本题主要考查培养基的制作和微生物的接种方法，意在强化学生对实验室的微生物的培养的相关知识的理解与掌握．