Question

12．农杆菌中的Ti质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题．

（1）基因工程操作中，除了图中的各种工具外，还需要DNA连接酶．
（2）在构建重组质粒时，应选用SalI、HindIII两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
（3）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入氨苄青霉素．
（4）含有重组Ti质粒的农杆菌进入烟草细胞后，目的基因将插入到烟草细胞的染色体DNA上．
（5）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素（生长调节剂、生长素和细胞分裂素）．

Answer 1

分析 据图分析，该过程涉及基因工程和植物组织培养，包括获取抗盐基因，基因表达载体的构建，用农杆菌转化法将目的基因导入烟草细胞，脱分化形成愈伤组织，再分化形成转基因抗盐烟草．

解答 解：（1）DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
（2）只要Sa1I酶切割含有目的基因的DNA与质粒，形成相同的黏性末端，容易发生自身连接和反向接入；HindIII会破坏目的基因；则在构建重组质粒时，应选用SalI、HindIII两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
（3）选用SalI、HindIII两种酶对质粒进行切割时，形成的重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏，为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入氨苄青霉素．
（4）将外源基因导入植物体内常用农杆菌转化法．该方法先将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的T-DNA上，然后通过农杆菌的转化作用，使目的基因进入植物细胞并插入到植物细胞的染色体DNA上．
（5）用植物组织培养技术将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株，脱分化形成的愈伤组织，经细胞增殖和分化进而形成完整植株，此过程必须添加植物激素进行调节，即生长素和细胞分裂素．
故答案为：
（1）DNA连接酶 
（2）Sal I、HindIII   质粒和含抗盐基因的DNA
（3）氨苄青霉素        
（4）染色体DNA       
（5）植物组织培养     植物激素（生长调节剂、生长素和细胞分裂素）

点评 本题考查基因工程和植物组织培养的相关知识，意在考查学生识图能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．