Question

华蟾素注射液是将蟾蜍的全皮阴干后，提炼而成的中药复方制剂，是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌HepG-2细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据题中信息回答下列问题。

Ⅰ.肝癌HepG-2细胞的培养：

（1）培养肝癌HepG-2细胞时，在培养基中加入适量的__________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入______。此外，每48h更换1次培养液，目的是__________。同时还要提供适宜的温度、______、氧气和二氧化碳等环境条件。

Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：

（2）用不同浓度的华蟾素注射液分别处理HepG-2细胞12h、24h和48h，测定华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响，结果如下图。

由图甲可知，华蟾素能有效地______肝癌HepG-2细胞增殖，且与______呈正相关。图乙的结果进一步表明，华蟾素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响体现在______________。

（3）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录、重组及形成正确的染色体结构、染色体分离、浓缩等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理HepG-2细胞48h后，采用RT-PCR技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如图丙。

①RT-PCR即逆转录-聚合酶链反应。其主要原理是：提取HepG-2细胞中的总RNA， 以一段_______作为引物，在________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行_________。

②由图丙可知，华蟾素注射液在基因水平上影响肝癌HepG-2细胞的机理是______。

Answer 1