Question

烟草花叶病毒(TMV)是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒，对农业生产造成很大的危害。研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因(CP基因)导入烟草并在转化的烟草植株中表达，使其获得对烟草花叶病毒的抗性。下图是转化烟草植株的培育流程，请回答：

(1)含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行 获得的。在对cDNA进行PCR扩增时，设计的引物自身不能含有 序列。

(2)将CP基因导入土壤农杆菌质粒的 ，其原因是 __________________

_________________________________________________________________ 。

(3)含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养过程中，对烟草叶的处理要求是 ________________________________________。

(4)用含重组质粒的土壤农杆菌感染烟草叶成功后，共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须 。

(5)在诱导芽、根的培养基中需添加 才能进行筛选，并要注意在不同的培养阶段需调整 的比例。

 

Answer 1

(1)反转录 互补

(2)T-DNA区 T-DNA可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物染色体的DNA中

(3)无菌，并切成小片

(4)遮光

(5)卡那霉素和氨苄青霉素 生长素和细胞分裂素

【解析】(1)cDNA文库是通过反转录获得的，引物自身不能含有互补序列。(2)CP基因可导入土壤农杆菌质粒的T-DNA区，因为T-DNA可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物染色体的DNA中。 (3)在植物组织培养过程中，有时需对外植体进行无菌处理并切成小片，以增加组织细胞对营养物质的吸收速度。(4)诱导形成愈伤组织时必须遮光，防止出现再分化。(5)重组质粒具有卡那霉素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因，所以需要在培养基中添加卡那霉素和氨苄青霉素进行筛选。同时，植物组织培养过程中要注意在不同培养阶段调整生长素和细胞分裂素的比例，以供植物不同发育时期的需要。