Question

赖氨酸是人体必需氨基酸之一，可促进人体发育、增强免疫力．乙图为赖氨酸转基因克隆牛的培育流程，其中字母表示相应的操作过程．请回答：

（1）构建基因表达载体的过程如甲图所示，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制酶，该过程中所使用的限制酶是

 

和

 

，除限制酶外，该过程还需要的工具酶有

 

．基因表达载体除图示结构外，还应含有

 

和

 

终止子等结构．
（2）为了获得较多的卵母细胞需要对供体注射

 

，卵母细胞要培养至

 

时期，才具备受精能力．
（3）胚胎成纤维细胞在培养过程中会出现

 

和

 

现象，分瓶时需用

 

  处理以得到细胞悬液，进而进行

 

培养使细胞增殖．
（4）图乙中a、b过程利用的主要生物技术有

 

和

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,动物细胞与组织培养过程

专题：

分析：1）分析题图：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，其中SmaⅠ酶的切割位点位于抗病基因（目的基因）上；质粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位点．所以要活动重组质粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ进行切割．
2）卵母细胞的采集主要方法是：用促性腺激素处理，使其超数排卵，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子体外受精．还可以从已屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞，或者直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞，叫活体采卵．采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养到减数第二次分裂中期后，才能与获能的精子受精．
3）动物体细胞核移植的过程：如高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减二分裂中期的卵母细胞，去核（显微操作）；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛．

解答： 解：（1）含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，但限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上，对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构，所以要获得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割．要获得含抗病基因的重组质粒，应选用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割质粒．重组质粒时，还需要DNA连接酶连接目的基因和质粒切口．基因表达载体包括目的基因+启动子+终止子+标记基因+复制原点．（2）卵母细胞的采集主要方法是：用促性腺激素处理，使其超数排卵．采集的卵母细胞，需要培养到减数第二次分裂中期后，才能与获能的精子受精．
（3）动物细胞培养的过程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→培养时，悬液中的细胞会很快贴附在瓶壁上，细胞表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养．
（4）图乙中a过程利用DNA拼接技术（基因工程）获取含有目的基因的胚胎成纤维细胞，b过程是通过动物细胞核移植技术培养克隆动物．
故答案为：
（1）PstI；EcoRI（位置可颠倒）；DNA连接酶；启动子；
（2）促性腺激素；减数第二次分裂中期；
（3）接触抑制；贴壁生长（两者顺序可颠倒）；胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）；传代；
（4）DNA拼接技术（基因工程）；动物细胞核移植技术．

点评：本题结合赖氨酸转基因克隆牛培育过程图，考查基因工程和动物细胞工程技术的相关知识，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点的能力；能运用所学知识与观点，对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论．