Question

20．醚苯磺隆是常见的除草剂，在环境中难以降解．某实验小组从某农药厂的污泥中富集、筛选出了一株醚苯磺隆降解菌株MB-1，并研究了其降解效率．请回答下列问题：
（1）该实验小组将取自生产醚苯磺隆农药厂废水处理池中的废水按5%的体积分数接入醚苯磺隆含量为200mg/L的MSM液体培养基中，每3d以5%的接种量接入新鲜的醚苯磺隆MSM液体培养基中，这一培养过程称为选择培养，其目的是初步筛选醚苯磺隆降解菌，并增大醚苯磺隆降解酶的浓度．
（2）该实验小组将培养液进行梯度稀释后，将稀释倍数为10³、
10⁴和10⁵的培养液分别取0.1mL接种到醚苯磺隆MSM固体培养基上，每个稀释倍数涂布三个培养基，最终形成的菌落数分别为
627、622、658、58、62、63、3、6、7个，则原菌液每升含有的细菌数为6.1×10⁹个，该计数方法得到的测量值一般比实际值偏小，其原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．若要检测水体中全部细菌（无论是否为活菌）的数目，应采用的方法是显微计数法．
（3）研究发现当培养基中含有葡萄糖和醚苯磺隆时，MB-1菌株只利用易于摄取的葡萄糖作为能源和碳源，同时诱导产生一种能分解醚苯磺隆的关键酶，该实验小组研究了不同的葡萄糖浓度对MB-1降解醚苯磺隆能力的影响，实验结果如图所示．
①同时含有葡萄糖和醚苯磺隆的培养基比只含醚苯磺隆的培养基更有利于MB-1菌株的生长繁殖，其原因可
能是MB-1菌株更容易吸收葡萄糖作为碳源和能源，并且醚苯磺隆具有一定的毒害作用；
②当葡萄糖浓度较低时，醚苯磺隆降解能力较弱的原因是MB-1菌株的碳源和能源供应不足，导致其产生能分解醚苯磺隆的关键酶不足，最有利于醚苯磺隆降解的葡萄糖浓度为200mg/L．

Answer 1

分析 1、两种纯化细菌的方法的比较：

	优点	缺点	适用范围
平板划 线分离法	可以观察菌落特征，对混合菌进行分离	不能计数	适用于好氧菌
稀释涂布 平板法	可以计数，可以观察菌落特征	吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延	适用于厌氧，兼性厌氧

2、检测土壤中细菌总数，可以看出采用的计数方法是稀释涂布平板法进行计数．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数．

解答 解：（1）根据实验的操作步骤可知，实验小组这一培养过程称为选择培养，用于初步筛选醚苯磺隆降解菌，并增大醚苯磺隆降解酶的浓度．
（2）利用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，需要选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，原菌液每升含有的细菌数为=（58+62+63）÷3÷0.1×10⁴×10³=6.1×10⁹个；当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，该计数方法得到的测量值一般比实际值偏小．若要检测水体中全部细菌（无论是否为活菌）的数目，应采用显微计数法．
（3）①同时含有葡萄糖和醚苯磺隆的培养基比只含醚苯磺隆的培养基更有利于MB-1菌株的生长繁殖，其原因可
能是MB-1菌株更容易吸收葡萄糖作为碳源和能源，并且醚苯磺隆具有一定的毒害作用；
②当葡萄糖浓度较低时，醚苯磺隆降解能力较弱，可能是MB-1菌株的碳源和能源供应不足，导致其产生能分解醚苯磺隆的关键酶不足；曲线图中看出，最有利于醚苯磺隆降解的葡萄糖浓度为200mg/L．
故答案为：
（1）选择培养    初步筛选醚苯磺隆降解菌，并增大醚苯磺隆降解酶的浓度
（2）6.1×10⁹    当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落     显微计数法
（3）①MB-1菌株更容易吸收葡萄糖作为碳源和能源，并且醚苯磺隆具有一定的毒害作用    ②MB-1菌株的碳源和能源供应不足，导致其产生能分解醚苯磺隆的关键酶不足    200mg/L

点评 本题结合曲线图，考查微生物的分离和培养的有关知识，要求考生识记微生物的分离与纯化的方法；能够结合曲线信息推测（3）的原因，能结合所学的知识准确答题．