Question

【题目】血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或CO2的运输．请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题．
（1）将实验流程补充完整：A为 ， B为 ． 凝胶色谱法是根据而达到蛋白质分离的有效方法．
（2）洗涤红细胞的目的是去除 ， 洗涤次数过少，无法除去；离心速度过高和时间过长会使一同沉淀，达不到分离的效果．洗涤干净的标志是 ． 释放血红蛋白的过程中起作用的是 ．
（3）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液（pH为7.0）的目的是 ． 如果红色区带 ， 说明色谱柱制作成功．

Answer 1

【答案】
（1）血红蛋白的释放；样品的加入和洗脱；相对分子质量的大小
（2）杂蛋白（血浆蛋白）；血浆蛋白；白细胞和淋巴细胞；离心后的上清液中没有黄色；蒸馏水和甲苯
（3）准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致；均匀一致的移动
【解析】解：（1）样品处理过程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析，所以A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱．凝胶色谱法的原理是分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢．（2）洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白，释放血红蛋白的过程是让红细胞吸水胀破．如果分层不明显，可能是洗涤次数少，未能除去血浆蛋白的原因．此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度．重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净．由于甲苯是表面活性剂的一种，可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂．（3）磷酸缓冲液（pH为7.0）能够准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致．如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关．所以答案是：（1）血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 相对分子质量的大小（2）杂蛋白（血浆蛋白） 血浆蛋白 白细胞和淋巴细胞 离心后的上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯（3）准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致 均匀一致的移动