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【题目】回答下列(一)、(二)小题:

(一)自生固氮菌是一种能独立固定氮气的细菌,其中有些好氧种类能产生PHB(一种生物可降解的热塑性塑料)。现欲从活性污泥中分离、纯化、筛选出高产PHB的固氮菌,操作流程如下:采集土样→富集培养→分离、纯化培养→初步筛选PHB固氮菌→筛选高产PHB固氮菌→保存备用。请回答:

(1)富集培养时,为达到筛选自生固氮菌的目的,在配制培养液时不应添加___________。培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上振荡培养,其目的是为细菌的生长提供。

(2)用于筛选高表达量菌株的方法之一是经涂布分离获得__________。进行分离、纯化培养时,要先将培养基倒入__________中,制成平板,此时所使用的培养基与富集培养时有所不同,添加了一定量的__________

(3)在纯化过程中,在固体培养基上划线时,下列操作正确的是__________

A.接种环采用70%酒精灭菌

B.接种时应在酒精灯火焰附近进行

C.划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连

D.划线分离时,需要把接种环深入到培养基中进行接种

(二)下图表示细胞融合技术的部分过程,请回答:

(1)若甲、乙细胞是植物细胞,在细胞融合时,首先需将___________消化除去。获得的丁细胞在植物组织培养是通过平衡___________配比进行调控,从而实现植物器官、组织的发生和形态建成。

(2)若该过程是制备癌胚抗原单克隆抗体的部分过程,实验中首先将___________注入小鼠体内,然后从产生免疫反应的小鼠脾脏中获取经免疫的___________细胞,将其与骨髓瘤细胞融合,筛选出___________细胞。

(3)若甲、乙细胞到丙细胞过程是哺乳动物体外受精过程,甲、乙细胞能够结合的基础是细胞膜表面有特异性___________功能的蛋白。若丁细胞为囊胚的外表扁平细胞,由其组成的结构称为___________

【答案】 含氮物质(氮源)充足的氧气 单菌落 培养皿 琼脂糖 B 细胞壁 植物激素 癌胚抗原 B淋巴 杂交瘤 识别 滋养层

【解析】由题干可知该题考查微生物的纯化和培养及细胞融合想知识,主要考察考生对知识点的识记理解掌握程度。

、(1)因为要分离固氮菌,所以可以选用不加氮源的培养基进行初步筛选。而培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上振荡培养,其目的是为细菌的生长提供充足的氧气。

(2)用于筛选高表达量菌株的方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法,都是为了获得单菌落,所以经涂布分离可以获得单菌落。制平板时需要将灭过菌的培养基倒入培养皿中进行凝固。此时所使用的培养基与富集培养时有所不同,添加了一定量的琼脂,因为富集培养基是液体,而此时的是固体,需要添加凝固剂琼脂。

(3)在纯化过程中,在固体培养基上划线时,一定要注意严格无菌条件,其中接种环采用灼烧灭菌,A错误。接种时应在酒精灯火焰附近进行,B正确。划线时最后一区的划线与第一区的划线不能相连,C错误。划线分离时,需要把接种环接触到培养基中进行接种,而不能深入到培养基中,D错误。

、(1)若甲、乙细胞是植物细胞,在细胞融合时,首先需将具有保护作用的细胞壁用纤维素酶和果胶酶去掉,才能获得原生质体。获得的丁细胞即杂种植物细胞在植物组织培养是通过平衡植物激素主要是生长素和细胞分裂素)配比进行调控,从而实现植物器官、组织的发生和形态建成。

(2)若该过程是制备癌胚抗原单克隆抗体的部分过程,实验中首先将抗原即癌胚抗原注入小鼠体内,然后从产生免疫反应的小鼠脾脏中获取经免疫的B淋巴细胞,将其与骨髓瘤细胞融合,筛选出既能产生特异性抗体还能大量增殖的杂交瘤细胞。

(3)若甲、乙细胞到丙细胞过程是哺乳动物体外受精过程,甲、乙细胞能够结合的基础是细胞膜表面有特异性识别功能的蛋白。若丁细胞为囊胚的外表扁平细胞,由其组成的结构称为滋养层细胞,内部是具有发育全能性的内细胞团

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