Question

12．临床实验表明，服用乳酸菌及其制品具有减少人体血清胆固醇含量、降低心脑血管发病率的功效．下面是从酸奶中筛选出高效降低胆固醇的乳酸菌的实验，请回答下列问题：
（1）制备固体培养基（MRS）：在普通的液体培养基中添加碳酸钙和琼脂，加热使其熔化，然后转移到锥形瓶中．经高压蒸汽灭菌法处理后，待其冷却至50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板．
（2）将少量酸奶制成1：10稀释液，再将梯度稀释到10^-6的稀释液涂布于添加了碳酸钙的乳酸菌培养基（MRS培养基）平板上，在无氧（填“有氧”或“无氧”）条件下37℃恒温培养72h．挑取有（填“有”或“无”）溶钙圈（或透明圈）的菌落，用平板划线法接种在MRS培养基上反复纯化至纯种备用．
（3）在普通的MRS液体培养基中添加适量胆固醇并用超声波振荡乳化20min，调PH至7.0，然后将纯化后的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养，一段时间后用特定显色剂分光光度法离心测定上清液中胆固醇的含量，以未接种的高胆固醇培养液作为对照，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出目的菌株．

Answer 1

分析 1、消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）制备固体培养基需要加入凝固剂--琼脂；对培养基的灭菌需要采用高压蒸汽灭菌法．
（2）乳酸菌属于厌氧菌，因此需要在无氧条件下培养．挑取有溶钙圈（或透明圈）的菌落，用平板划线法接种在MRS培养基上反复纯化至纯种备用．
（3）在普通的MRS液体培养基中添加适量胆固醇并用超声波振荡乳化20min，调PH至7.0，然后将纯化后的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养，一段时间后用特定显色剂分光光度法离心测定上清液中胆固醇的含量，以未接种的高胆固醇培养液作为对照，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出目的菌株．
故答案为：
（1）琼脂       高压蒸汽灭菌
（2）无氧       有      平板划线
（3）胆固醇       胆固醇       未接种的高胆固醇培养液

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记无菌技术；识记接种微生物常用的两种方法，能结合所学的知识准确答题．