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    绿色荧光蛋白基因(GFP)被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白位的理想标记。请根据图表回答下列问题。
    (1)若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是T↓TCGA，N端伸出的核苷酸的碱基序列是C↑TGCA，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶_____，再对_____进行切割。
    (2)若对符合设计要求的重级质粒A进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图表中的信息分析，若采用BamH1和Pst1酶切，可得到________种DNA片段。
    (3)检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可在荧光显微镜下观察GFP的表达，图中绿色荧光蛋白转基因克隆猪的转基因操作中的GFP既是______也是_____。
    (4)绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中涉及到多项现代生物技术，图中⑤⑥⑦过程属于_________，而⑨过程属于____________。
    (1)HindIII和PstⅠ    Ti质粒
    (2)2
    (3)目的基因    标记基因
    (4)核移植   胚胎移植
    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源： 题型：

    30.（18分）斑马鱼的酶D由17号染色体上的D基因编码。具体纯合突变基因（dd）的斑马鱼胚胎会发出红色荧光。利用转基因技术将绿色荧光蛋白（G）基因整合到斑马鱼17号染色体上，

    带有G基因的胚胎能够发出绿色荧光。未整合G基因的染色体的对应位点表示为g。用个体

    M和N进行如下杂交实验

    （1）在上述转基因实验中，将G基因与质粒重组，需要的两类酶是       和       。将

    重组质粒显微注射到斑马鱼           中,整合到染色体上的G基因               后，

    使胚胎发出绿色荧光。

    （2）根据上述杂交实验推测

    代M的基因型是            （选填选项前的符号）

    a. DDGG      b. DDGg      c. DdGG         d. DdGg

    （3）杂交后，出现红·绿荧光（既有红色又有绿色荧光）胚胎的原因是亲代           （填

    “M”或“N”）的初级精（卵）母细胞在减数分裂过程中，同源染色体的           发生了交换，导致染色体上的基因重组。通过记录子代中红·绿荧光胚胎数量与胚胎总数，可计算得到该亲本产生的重组配子占其全部配子的比例，算式为            

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    科目：高中生物 来源：2010年吉林省吉林市毓文中学高二下学期期中考试生物卷 题型：综合题

    （18分）2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝色或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
    （1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶II的切点。
    ①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
    ②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
    ③在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来＿＿＿＿，理由是：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
    （2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也是最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿。
    （3）从分子水平上，检测绿色荧光蛋白基因是否插入到猪胎儿成纤维染色体的DNA上，检测方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，检测绿色荧光蛋白基因是否表达，检测方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
    （4）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为表达载体上的＿＿＿＿＿＿＿＿。获得的转基因猪，可以解决的医学难题是可以避免＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

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    科目：高中生物 来源：2010年广东省汕头市金山中学高二下学期期中试题生物卷 题型：综合题

    2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

    （1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。若限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是一G↓GATCC一，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC一。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
    ①请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。
    ②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来? ＿＿＿＿＿。理由是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
    （2）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能,且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以运用作为基因表达载体上的＿＿＿＿＿＿。
    （3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。然后还要通过＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上。
    （4）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通过显微操作将其细胞核去除。
    （5）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿等物质。
    （6）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程属于＿＿＿＿＿＿生殖。目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：＿＿＿＿＿＿(用数字表示)。
    ①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
    ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计
    ③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
    ④表达出蓝色荧光蛋白

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    科目：高中生物 来源：2014学年高一生物人教版必修二第6章《从杂交育种到基因工程》练习卷B（解析版） 题型：综合题

    斑马鱼的酶D由17号染色体上的D基因编码。具体纯合突变基因（dd）的斑马鱼胚胎会发出红色荧光。利用转基因技术将绿色荧光蛋白（G）基因整合到斑马鱼17号染色体上，带有G基因的胚胎能够发出绿色荧光。未整合G基因的染色体的对应位点表示为g。用个体M和N进行如下杂交实验

    ⑴在上述转基因实验中，将G基因与质粒重组，需要的两类酶是??????? 和???????? 。将重组质粒显微注射到斑马鱼受精卵中,整合到染色体上的G基因?????????????? 表达后，使胚胎发出绿色荧光。

    根据上述杂交实验推测：

    ⑵M的基因型是??????????? （选填选项前的符号）

    a. DDGG???????? b. DDgg??????? c. Ddgg?????? d. DdGg

    ⑶杂交后，出现红·绿荧光（既有红色又有绿色荧光）胚胎的原因是亲代??????? （填“M”或“N”）的初级精（卵）母细胞在减数分裂过程中， 同源染色体的__________发生了交换，导致染色体上的基因重组。

     

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    科目：高中生物 来源：2010年吉林省吉林市高二下学期期中考试生物卷 题型：综合题

    （18分）2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝色或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

     

     

     

     

     

     

     

    （1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶II的切点。

    ①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

    ②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。

    ③在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来＿＿＿＿，理由是：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

    （2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也是最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿。

    （3）从分子水平上，检测绿色荧光蛋白基因是否插入到猪胎儿成纤维染色体的DNA上，检测方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，检测绿色荧光蛋白基因是否表达，检测方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

    （4）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为表达载体上的＿＿＿＿＿＿＿＿。获得的转基因猪，可以解决的医学难题是可以避免＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

     

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