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    如图表示某种绿色荧光蛋白基因表达载体的构建过程．绿色荧光蛋白基因有720个碱基对（bp），质粒有5369个碱基对（bp），其上酶切位点和标记基因如图．请回答：

    （1）限制酶BamHI的识别序列和切割位点是G↓GATTC，则该酶切割DNA后形成的黏性末端是
     
    ．过程③所需的工具酶是
     
    ．
    （2）②过程可以通过PCR技术进行，为了准确获取目的基因，设计引物对是关键．设计引物对的依据
     
    ．
    （3）基因工程中常用限制酶酶切后再电泳的方法进行重组质粒的鉴定和筛选，电泳时DNA片段的迁移速率与片段大小呈负相关．

    ①图中质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后进行电泳，出现了一条长度为5300bp的DNA条带（如图1），而重组质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切，电泳后形成了两条长度分别为
     
    和
     
    的腿片段条带．
    ②图中质粒经BamHI单酶切后电泳图谱如图2．请在答题纸相应图中画出重组质粒用BamHI单酶切并电泳后条带所在的大致位置．
     

    （4）该基因工程中的受体细胞无任何抗生素抗性，某同学用只含有氨苄青霉素的培养基筛选导入重组质粒的受体细胞．他能否成功？为什么？
     
    ．
    考点：基因工程的原理及技术
    专题：
    分析：分析图解：在质粒上存在一个复制原点，两个抗性基因和三个酶切位点，但是限制酶BamHI的切割位点存在于四环素抗性基因中．因此在利用BamHI和HindⅢ双酶切割时，原质粒上将缺少部分片段；而目的基因也用这两种酶进行切割，能够保证目的基因和质粒之间定向连接．因此图中③表示利用DNA连接酶形成重组质粒．
    PCR技术中，在低温复性的过程中，引物将结合到DNA的两条链上，并且遵循碱基的互补配对原则．
    电泳技术中，电泳时DNA片段的迁移速率与片段大小呈负相关，因此碱基对多的在上，少的在下．
    解答： 解：（1）限制酶BamHI的识别序列和切割位点是G↓GATTC，则该酶切割DNA后形成的黏性末端是GATTC--．过程③表示切割后的目的基因和质粒发生重组，该过程需要DNA连接酶．
    （2）目的基因的扩增可以通过PCR技术进行，为了准确获取目的基因，设计引物对是关键，设计引物对的依据绿色荧光蛋白基因两端的部分DNA序列．
    （3）①根据题意可知，绿色荧光蛋白基因有720个碱基对（bp），质粒有5369个碱基对（bp）．图中质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后进行电泳，出现了一条长度为5300bp的DNA条带（如图1），说明5300bp的DNA条带是原质粒中切去部分片段的质粒；而目的基因也用这两种酶进行切割，因此形成的重组质粒上仍然存在这两种酶的识别位点．则重组质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切，电泳后形成了两条长度分别为5300bp（质粒）和720bp（目的基因）的片段条带．
    ②质粒有5369个碱基对，质粒经BamHI单酶切后碱基长度不变．而重组质粒的长度=5300+720=6020kb，用BamHI单酶切割长度也不变．由于电泳时DNA片段的迁移速率与片段大小呈负相关，因此电泳后重组质粒在图2中质粒之上．
    （4）由于该基因工程中的受体细胞无任何抗生素抗性，而导入质粒或重组质粒的受体细胞都具有氨苄青霉素抗性，都能正常生长，因此用只含有氨苄青霉素的培养基筛选导入重组质粒的受体细胞不能成功．
    故答案为：
    （1）GATTC--DNA连接酶  
    （2）绿色荧光蛋白基因两端的部分DNA序列
    （3）①5300bp    720bp  
     ②如右图

    （4）不能成功，导入质粒或重组质粒的受体细胞都具有氨苄青霉素抗性，都能正常生长
    点评：本题考查了基因工程的相关知识，意在考查考生的分析能力和理解应用能力，难度适中．考生要明确基因工程的工具酶的作用以及PCR技术中引物的特点；能够从题干获取有效解题信息；在目的基因筛选时不能仅仅根据标记基因鉴定．
    练习册系列答案
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    B、酶浓度恒定，温度、pH等条件适宜且恒定--V与底物浓度成反比
    C、酶浓度和底物一定，在pH的适宜的条件下--V与温度成反比
    D、酶浓度和底物一定，在温度适宜的条件下--V与pH成正比

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    下列有关病毒的叙述，正确的是（　　）
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    B、病毒的衣壳决定了病毒抗原特异性
    C、病毒一般要在人工培养基上培养
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    如图1是分泌蛋白的合成、加工、分泌过程示意图，图2表示三种动物细胞器中的有机物含量，请据图回答下列问题：

    （1）分离细胞器常用的方法是
     
    ．图2中甲表示的细胞器是
     
    ，细胞器乙可用图1中的
     
    （填字母）来表示．
    （2）研究图1生理过程一般采用的方法是
     
    ，该过程中分泌蛋白分泌出细胞的时
     
    （填“需要”或“不需要”）能量．
    （3）若图1过程中合成了一条含两个天冬氨酸（R基为-C2H4ON）、分子式为CxHyOzN17S2的多肽链，已知氨基酸的平均分子量为126，则该多肽链形成过程中失去的水分子质量最大为
     
    ．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    如图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，据图回答相关问题：

    （1）若需在短时间内获得较多的GFP基因，通常采用
     
    技术．
    （2）过程①是转基因技术的核心步骤，为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要把GFP基因片段正确插入表达载体的
     
    和
     
    之间．
    （3）③过程在使用合成培养基进行培养时，通常需要加入
     
    等天然成分．
    （4）②过程通常采用的技术是
     
    ；在个体水平上检测GFP基因是否表达的方法是
     
    ．
    （5）④过程通过
     
    技术实现．科学家欲获得多个相同性状的绿色荧光小鼠，则应该选择发育良好、形态正常的桑椹胚或
     
    ，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分割针进行分割．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    研究发现，将心肌细胞直接移植到心脏受损部位能够改善心脏功能，是一种治疗缺血性心脏病的有效方法．胚胎干细胞（ESC）在体外能诱导分化为心肌细胞，但同时会产生大量非心肌细胞．科研人员利用基因工程技术，使增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因在心肌细胞特异性表达，以利于从ESC分化来的细胞中筛选心肌细胞．该基因工程技术基本流程如图．请回答：

    （1）过程①中，利用限制酶Mlu I、Nhe I处理以获得
     
    ．
    （2）过程②的目的是使
     
    基因在
     
    细胞中特异性表达．
    （3）过程③中，从囊胚分离出
     
    ，进行培养可获得ESC．
    （4）进行过程④时，
     
    （能/不能）在饲养层细胞上进行．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    甲型血友病患者血液中因缺乏凝血因子Ⅷ常发生出血不止的现象，危及患者生命，而救治的主要措施就是给他输入凝血因子Ⅷ．运用基因工程及胚胎工程知识回答与凝血因子Ⅷ的生产相关的问题．
    （1）基因工程中培养能产生人凝血因子Ⅷ的转基因羊时，科学家将人凝血因子Ⅷ的基因与羊乳腺蛋白基因的
     
    等调控组件重组在一起，通过
     
    方法，导入羊的受精卵中．
    （2）在制作受精卵时，活体采卵前要先用
     
    对母羊进行处理，促进其多排卵．在受精前，要对精子进行获能处理，常用的方法有培养法和
     
    ．
    （3）完成体外受精后，受精卵还要进行体外培养，培养液的主要成分除无机盐和有机盐外，还需添加
     
    等营养成分，以及
     
    等物质．
    （4）为提高转基因羊的繁育效率，常采用
     
    的方法获得多个相同的胚胎．
    （5）培育成功的转基因羊在性成熟后，就可形成一个以乳腺为基础的人凝血因子Ⅷ发生器，请写出乳腺细胞中人凝血因子Ⅷ基因表达的全过程：
     
    最后从羊奶中分离出人凝血因子Ⅷ，再进一步加工生产，满足临床需要．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    分析有关资料，回答有关遗传、基因工程问题．
    油菜的株高由等位基因G和g决定，GG为高杆，Gg为中杆，gg为矮杆．B基因是另一种植物的高杆基因，B 基因与 G 基因在油菜的株高上有相同的效果，并且株高与这两个基因的数量正相关．如图1所示是培育转基因油菜的操作流程．请回答下列问题：
    （1）步骤①中用到的工具酶是
     
    ，培育转基因油菜主要运用了转基因技术和
     
    技术．
    （2）图1中质粒是双链闭合环状的DNA分子，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶M和N切割，通过凝胶电泳分离分析得如表．限制酶M和N的识别序列和切割位点如图2所示．
    凝胶电泳结果（1kb=1000对碱基）
    （+表示该片段的存在以及含量）
    分子量（kb） 酶M 酶N 酶M+酶N
    1.0 + +
    2.0 +
    3.0 +
    4.0 +
    5.0 +
    6.0 +
    7.0 +
    9.0 +
    10.0 +
    ①该质粒的长度为
     
    kb．在该质粒中，M酶与N酶的切割位点分别有
     
    、
     
    个．
    ②M酶与N酶切出的能相互粘连的末端在酶的作用下相互连接，请将连接的结果表示出来：
     
    ．连接后的序列是否可以用M酶、N酶进行切割：
     
    ．
    如图3所示为B基因的结构示意图以及限制酶M和N的切割位点．
    ③现用图3中基因作为目的基因，若采用直接从供体细胞中分离，可选用酶
     
    来切割．
    ④已知Ⅱ区的碱基数是2000个，其中阴影区域碱基数是800个，空白区域中G和C的总数共有400个，则由该区转录的mRNA中A和U总数是
     
    ．
    （3）若将一个B基因转移到矮杆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达，且B基因与g基因位于非同源染色体上，这样的转基因油菜植株表现型为
     
    ．
    （4）若将一个B基因转移到中杆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达，培育了甲～丁四种转基因油菜（如图4所示）．
    ①与甲的株高相同的是
     
    ．四种转基因油菜分别自交，在不考虑交叉互换的前提下，子代有3种表现型的是
     
    ．
    ②另有一种转基因油菜自交子代也有3种表现型，请在如图5中的染色体上标出B基因的位置．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    如图是人体感染H1N1病毒后，神经-激素-免疫调节共同调节清除病毒的过程．
    （1）当人感染H1N1病毒常发烧的原因是病毒产生的毒素或人体T淋巴细胞分泌的
     
    改变了下丘脑中体温调节中枢的功能，最终使有关腺体分泌的
     
    激素和肾上腺素的量增加，从而使产热增加．
    （2）感冒发烧时应多喝水，此时血浆渗透压降低，刺激下丘脑中的
     
    ，垂体释放的
     
    减少，使
     
    对水分的重吸收减弱，尿液增加，有利于毒素排出体外．
    （3）当人精神状态不好时（如焦虑、紧张），更易感染H1N1病毒而患病，其原因是
     
    ．
    （4）从图信息得到当人体受到焦虑紧张刺激时，兴奋只能由大脑传到下丘脑，再传到垂体的原因是
     
    ．

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