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    3．常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离这种酵母菌，操作如下：
    （1）制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是是防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵．
    （2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环．在第二次及以后划线时，总是从上-次的末端开始划线，这样做的目的是将聚集的菌落逐步减少以获得单个菌落．划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落．造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始．
    （3）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一碳源的固体培养基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌菌落．实验中所用培养基按功能属于选择培养基．
    （4）若要检测土样中的酵母菌含量，应采用稀释涂布平板法．在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．然后，将lmL土壤溶液稀释分别稀释10倍和100倍，每种稀释度各在3个平板上分别接人0．lmL稀释液，经1适当培养后，6个平板上的菌落数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为5.8×106个．

    分析 1、选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的．利用选择培养基和转基因技术能够筛选利用葡萄糖和木糖产生酒精，且对酒精的耐受能力强的酵母菌．
    2、培养基配制时的注意事项
    ①全程要求无菌操作，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效地避免操作者自身被微生物感染．
    ②培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板．可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板．操作时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基．
    ③平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，若将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染．
    ④在倒平板的过程中，不能将培养基溅到皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生．

    解答 解：（1）为了防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染，制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵．
    （2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环．在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做可以将聚集的菌落逐步减少以获得单个菌落．划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落．造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始．
    （3）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一碳源的固体培养基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌菌落．实验中所用培养基按功能属于选择培养基．
    （4）若要检测土样中的酵母菌含量，应采用稀释涂布平板法．在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，用于检测培养基平板灭菌是否合格．稀释涂布平板法中，一般选用30～300个菌落数进行计数，因此采用稀释10倍和菌落数分别为59、57、58的进行计算，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为=（59+57+58）÷3×10÷（0.1×10-3）=5.8×106个．
    故答案为：
    （1）是防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染     防止外来杂菌入侵
    （2）接种环     将聚集的菌落逐步减少以获得单个菌落    接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始
    （3）碳源    菌落     选择
    （4）稀释涂布平板检测培养基平板灭菌是否合格     5.8×106

    点评 本题考查了微生物分离与培养的有关知识，意在加强学生掌握相关的操作技能，掌握微生物分离与纯化的方法．

    练习册系列答案
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