Question

【题目】乙醇燃料已成为国际上普遍公认可降低环境污染和取代化石燃料的主要资源。可利用纤维素分解菌将植物秸秆中的纤维素降解为小分子糖类，后经酵母菌发酵即可生产乙醇。下面是分离、筛选纤维素分解菌的部分过程，请回答相关问题：

（1）从富含纤维素的环境中分离得到纤维素分解菌，这说明寻找目的菌株的方法之一是___________。为了分离纤维素分解菌，在配制选择培养基时以____________作为唯一碳源；从代谢类型分析，培养反刍动物胃中的纤维素分解菌时，必须提供无氧环境的原因是____________。

（2）在筛选纤维素分解菌时，可在培养基中加入_________染料，然后根据菌落周围是否产生______来筛选目的菌株。

（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是____________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。分析造成第二划线区域的第一条线无菌落的可能原因是____________。

（4）初步筛选后，还需进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶活性的测定方法一般是____________。

Answer 1

【答案】到相应生存环境中寻找 纤维素 动物胃中的纤维素分解菌为异养厌氧型，在无氧条件下才能存活 刚果红 透明圈 接种环 接种环灼烧未冷却划线（或未从第一区域末端开始） 对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定

【解析】

分解纤维素的微生物的分离实验的原理：
①土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。
②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。

（1）从富含纤维素的环境中分离得到纤维素分解菌，这说明寻找目的菌株的方法之一是到相应生存环境中寻找。为了分离纤维素分解菌，在配制选择培养基时以纤维素作为唯一碳源；动物胃中的纤维素分解菌为异养厌氧型，在无氧条件下才能存活，因此培养反刍动物胃中的纤维素分解菌时，必须提供无氧环境。

（2）刚果红染料可以与纤维素形成红色复合物，故在筛选纤维素分解菌时，可在培养基中加入刚果红染料，然后根据菌落周围是否产生透明圈来筛选目的菌株。

（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。可能是第二次划线过程中，接种环灼烧未冷却划线（或未从第一区域末端开始）导致。

（4）初步筛选后，还需进行发酵产纤维素酶的实验，发酵方法有固体发酵和液体发酵；纤维素酶活性的测定方法一般是对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。