Question

【题目】金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：
（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过获得用于PCR扩增。
（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的位点。设计引物时需要避免引物之间形成 ， 而造成引物自连。
（3）图中步骤1代表 ， 步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。
（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但的引物需要设定更高的退火温度。
（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有（填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物）。

Answer 1

【答案】
（1）逆转录；cDNA
（2）限制性核酸内切酶；碱基互补配对
（3）变性
（4）引物与模板；GC含量高
（5）②③
【解析】