补充正常凝血因子F8可以治疗甲型血友病,因此可以利用转基因技术人工生产F8。
某种大肠杆菌的质粒中含有β-半乳糖苷酶α片段序列(图2),大肠杆菌的DNA分子中则含有β-半乳糖酶ω片段序列(图1),由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列,可以使培养基中含有X-gal底物转变成蓝色产物,当缺少任意一个α或ω片段序列,X-gal底物不能转变成蓝色产物。HindⅢ、 EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶,下图3中箭头所指为三种限制酶的切点。
⑴要能筛选出转基因菌种,应选用的限制性内切酶是 ,选择的依据是 。
⑵限制酶作用于DNA的部位是
A.氢键 B.糖苷键 C.磷酸二酯键 D.肽键
⑶控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成,该合成的过程称为 。将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后,再将大肠杆菌接种到含有X-gal底物的培养基培养一段时间后,培养基中出现较多的蓝色菌落,这是因为 。
⑴ EcoRI(1分) 切断α片段序列,为重组DNA分子的筛选提供标记(2分)
⑵C(1分)
⑶逆(反)转录(1分) 同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的粘性末端,因此会出现质粒的自我环化的空载现象,空载质粒含有完整的α、ω片段序列,能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物。(2分)
【解析】
试题分析:⑴根据题意,当大肠杆菌缺少任意一个α或ω片段序列,X-gal底物不能转变成蓝色产物,故可破坏质粒中的α片段序列(含两个酶切位点:HindⅢ、 EcoRI),利用X-gal底物来检测目的基因是否转入大肠杆菌,但不能选择HindⅢ,是因为HindⅢ的切割位点在F8基因内,破坏了目的基因的完整,将来就无法合成正常凝血因子F8。⑵限制酶作用于DNA分子的磷酸二酯键,使DNA分子断裂。⑶通过mRNA来合成基因的过程称为逆转录;由于用同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的黏性末端,因此会出现质粒的自我环化的空载现象,空载质粒含有完整的α、ω片段序列,能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物。
考点:本题主要考查与基因工程相关的知识,意在考查考生能理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系,形成知识网络结构的能力。
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