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    (本题16分)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

    （1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有____ 、____个游离的磷酸基团。

    （2）若对图中质粒进行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越_______________。

    （3）要用图1中的质粒和图2中外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割,原因是 。

    （4）与只使用EcoR Ⅰ相比较，使BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________________ __。

    （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。

    （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了____________________________。

    （7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在___________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

    （1）0、2 （2）高 （3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因

    （4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 （5）DNA连接

    （6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞 （7）蔗糖为唯一含碳营养物质

    【解析】

    试题分析：（1）由图可知质粒分子是环状的DNA分子，在切割前没有游离的磷酸基团故是0个，经酶切割后成为一个链状的DNA，会有两个游离的磷酸基团。

    （2）若对图中质粒进行改造，由图可知SmaI的酶切位点中GC含量多，，它们之间有3个氢键，插入的Sma Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越高。

    （3）由图可知在目的基因的中间有SmaI的酶切位点，如果用该酶酶切会破坏外源DNA中的目的基因。另外质粒中的SmaI基因位于质粒的抗性基因中，也会破坏质粒的抗性基因。

    （4）用两种酶切割质粒和目的基因，因为严格遵循碱基互补配对原则，两种酶切产生的粘性末端不同，可防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化。

    （5）将切割后的质粒与目的基因片段混合后需要加入DNA连接酶，能促进它们的链接。

    （6）重组质粒中的抗性基因是为了鉴别和筛选含有目的基因的细胞。即可以涂在相关抗生素的培养基上，能长出来的可初步确定是想要的目的菌株。

    （7）因为要获取具有吸收蔗糖能力的菌株，所以应将构建好的放在以蔗糖为唯一碳源的培养基上，如果能长出菌落，说明基因导入成功。

    考点：本题考查基因工程相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度和理解能力。

    练习册系列答案
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    （1）CO2浓度通过直接影响 （1分）的产生来影响光合作用强度。若适当降低CO2 浓度，短时间内叶绿体中[H]含量的变化是 （1分）。

    （2） 的减少使叶片呈现黄化色泽。突变可能 （填“促进”或“抑制”）叶绿素a向叶绿素b转化的过程。另据测定，突变体处于发育初期的叶片，类胡萝卜素与叶绿素的比值为0.48，可以推测，类胡萝卜素在色素组成中所占的比例随叶片发育逐渐 。

    （3）突变体叶片中叶绿体的CO2的消耗速率比野生型低 μmolCO2·m-2·s-1。研究人员认为气孔因素不是导致突变体光合速率降低的限制因素，依据是： 。

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    （2）如果要人工控制牛的性别，可采用 技术，若要对早期胚胎进行性别鉴定，可以取 细胞进行DNA分析，所使用的基因探针来自 染色体。

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