Question

【题目】I、尿素是一种高浓度氮肥用长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用，分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO47H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

（1）根锯培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌_____（能/不能），原因是________________________，不能选择出只分解以尿素为氮源的微生物。

（2）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用__________法接种。

（3）接种前要对培养基进行___________。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_______条件下进行。

（4）一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是_____，应当怎样操作才可避免此种现象？_______________________。

II、下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。请据图回答下列问题：

（1）过程①至②所获取的抗体1 称为___________，其中过程①是指细胞工程中的____________技术。

（2）④过程需要__________酶，⑤过程则需要的工具酶为___________________。

（3）②处需要筛选，其培养基称为_____________ （液体培养基/选择培养基/鉴别培养基）。

（4）如果想用棉花产生该种抗体，则⑥过程的受体细胞通常选用__________菌，经过筛选后再侵染棉花体细胞，转化成功后通过______________技术获得能产抗体的转基因棉花植株。

Answer 1

【答案】不能 培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源 稀释涂布平板 灭菌 无菌 菌液浓度过高 对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数） 单克隆抗体 细胞融合 逆转录 限制酶和DNA 连接酶 选择培养基 农杆 植物组织培养

【解析】

分解尿素的细菌都能合成脲酶，因此可以选用以尿素为唯一氮源的培养基来分离细菌，并且用琼脂糖来代替琼脂作为微生物培养基的固化剂，由于分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解，因此在以尿素为唯一氮源的培养基上，分解尿素的菌能以尿素为氮源生长，而不能分解尿素的菌因缺乏氮源而无法生长。常用的接种微生物的方法有稀释涂布平板法和平板划线法，稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基上进行培养，在稀释度足够高的菌液里，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，获得由单个细胞繁殖而来的菌落，稀释涂布法常用来统计样品中活菌的数目。据题Ⅱ图分析，细胞A表示效应B细胞，细胞Y表示杂交瘤细胞，结构甲表示基因表达载体，①过程表示动物细胞融合，②过程表示杂交瘤细胞的培养，③过程表示提取mRNA，④过程表示逆转录，⑤表示基因表达载体的构建，⑥表示导入受体细胞。

I、（1）尿素分解菌所需要的氮源是尿素，根锯培养基的成分判断，表中的蛋白胨可以为微生物的生存提供氮源，尿素不是唯一氮源，所以不能选择出只分解以尿素为氮源的微生物。

（2）固体培养基上的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，稀释涂布平板法适用于微生物的统计计数。

（3）接种前要对培养基进行灭菌，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。

（4）一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高，为避免此种现象，应对菌液进行梯度稀释。

II、（1）过程①至②所获取的抗体1称为单克隆抗体，其中过程①是指细胞工程中的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合技术。

（2）④是由mRNA形成DNA的过程，表示逆转录，需要逆转录酶；⑤过程为基因表达载体的构建，需要的工具酶为限制酶和DNA连接酶。

（3）②过程表示杂交瘤细胞的培养，需要筛选，其培养基称为选择培养基。

（4）如果想用棉花产生该种抗体，则⑥导入受体细胞过程中受体细胞通常选用土壤农杆菌，经过筛选后再侵染棉花体细胞，转化成功后通过植物组织培养技术，即脱分化和再分化过程，获得能产抗体的转基因棉花植株。