Question

【题目】赖氨酸缺陷型大肠杆菌（）是指经过诱变处理后，失去产生赖氨酸能力的大肠杆菌。回答下列问题：

（1）培养基的配置。配置4类培养基：完全培养基、基本培养基、补充赖氨酸的基本培养基（）、无氮基本培养基。在培养基配制过程中，______（需要/不需要）保持无菌环境。若需要配制固体无氮培养基，则需在液体无氮培养基中添加______。

（2）菌株的诱变。将野生型大肠杆菌接种在液体完全培养基中培养6h，目的是进行_____。然后将菌液进行诱变处理50min，去除诱变剂后，需将菌株转入液体无氨基本培养基培养至菌体数量不再上升，目的是耗尽菌体中储存的______。

（3）菌株的筛选。取上述菌悬液，涂布在固体培养基上，待长出菌落后，一一对应地接种至固体基本培养基和固体培养基上，培养一段时间后，挑取_____的菌落，即为菌株。

（4）菌株的保存。将筛选获得的株接种于______，4℃下保存。

（5）利用菌株筛选能分泌赖氨酸的益生菌。将菌株与_____培养基混合，制成固体平面培养基，然后将需筛选的益生菌涂布在此平板上，培养一段时间后，选取______的菌落即为所需。

Answer 1

【答案】不需要 琼脂糖 扩大培养 氨基酸 在基本培养基上不生长（或生长不佳），而培养基上能生长（良好生长）的 固体斜面培养基 固体基本 周围长有

【解析】

1、在一般培养温度下呈固体状态的培养基都称固体培养基。在液体培养基中加入1.5%~2.0%左右的琼脂，加热至100℃溶解，40℃下冷却并凝固，使其成为固体状态即为固体培养基。

2、液体培养基，固体培养基的对应词，是微生物或动植物细胞的液状培养基。它具有进行通气培养、振荡培养的优点。在静止的条件下，在菌体或培养细胞的周围，形成透过养分的壁障，养分的摄入受到阻碍。由于在通气或在振荡的条件下，可消除这种阻碍以及增加供氧量，所以有利于细胞生长，提高生产量。

3、灭菌处理：要获得微生物纯培养，必须避免杂菌污染，因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言，更是要进行严格的灭菌。

（1）在培养基配制过程中，不需要保持无菌环境，要获得微生物纯培养，必须避免杂菌污染，在配制完成后需对培养基进行灭菌处理。在液体培养基中加入琼脂，加热至100℃溶解，40℃下冷却并凝固，使其成为固体状态即为固体培养基。

（2）将野生型大肠杆菌接种在液体完全培养基中培养6h，由于在通气或在振荡的条件下，液体培养可消除养分摄入阻碍以及增加供氧量，所以有利于细胞生长，提高生产量，使菌株得到扩大培养。然后将菌液进行诱变处理50min，去除诱变剂后，需将菌株转入液体无氨基本培养基培养（即不含氨基酸的培养基)至菌体数量不再上升，目的是使菌体无法从外界摄入氨基酸，从而耗尽菌体中储存的氨基酸。

（3）取上述菌悬液，涂布在固体培养基上，待长出菌落后，一一对应地接种至固体基本培养基和固体培养基上，培养一段时间后，赖氨酸缺陷型大肠杆菌是指失去产生赖氨酸能力的大肠杆菌，在基本培养基上不生长或生长不佳，而培养基上能生长（良好生长），在固体培养基上挑取以上生长情况的菌落，即为菌株。

（4）斜面培养基用于菌种扩大转管及菌种保藏，将筛选获得的株接种于固体斜面培养基，4℃下保存。

（5）将菌株与固体基本培养基混合，制成固体平面培养基，然后将需筛选的益生菌涂布在此平板上，培养一段时间后，由于此种益生菌能够分泌赖氨酸供给菌株，故选取周围长有的菌落即为所需的能分泌赖氨酸的益生菌。