[题目]黄曲酶毒素B1是一种较强的致癌物质.危害人类健康.为了准确检测AFBI的浓度.科学家尝试用基因工程的方法开发抗AFE1抗体.进行了如下实验.回答下列问题:(1)用兔疫小鼠.取小鼠脾脏细胞与融合.得到杂交瘤细胞.(2)提取杂交瘤细胞的总RNA.经得到cDNA.再利用特异性引物经过扩增得到抗AFB1抗体基因.科学� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】黄曲酶毒素B1（AFB1）是一种较强的致癌物质，危害人类健康。为了准确检测AFBI的浓度，科学家尝试用基因工程的方法开发抗AFE1抗体，进行了如下实验。回答下列问题：

（1）用___________兔疫小鼠，取小鼠脾脏细胞与___________融合，得到杂交瘤细胞。

（2）提取杂交瘤细胞的总RNA，经___________得到cDNA，再利用特异性引物经过___________扩增得到抗AFB1抗体基因。科学家选用杂交瘤细胞而非被免疫小鼠的脾脏细胞的原因:__________________。

（3）随后，用限制NcoⅠ和BamHⅠ酶切以上抗AFB1抗体基因和质粒，经DNA连接酶处理后将重组质粒导如大肠杆菌，为得到抗AFB1抗体，需对成功转化的大肠杆菌进行破碎处理，然后才能提纯得到目标抗体的原因是_________________________________。

【答案】AFB1骨髓瘤细胞逆转录PCR杂交瘤细胞表达（或含有）抗AFB1抗体的基因，且可无限增殖方便保存大肠杆菌是原核生物，无内质网和高尔基体，无法分泌抗体

【解析】

单克隆抗体的制备过程：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。基因工程的基本步骤：目的基因的获取、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

（1）根据题意分析，该抗体是由黄曲酶毒素B1诱导形成的，因此应该用黄曲酶毒素B1（AFB1）免疫小鼠，然后从小鼠的脾脏中提取B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞。

（2）由RNA得到cDNA的过程为逆转录；得到的cDNA可以利用PCR技术进行扩增；由于杂交瘤细胞可以表达（或含有）抗AFB1抗体的基因，且可无限增殖方便保存，所以科学家选用杂交瘤细胞而非被免疫小鼠的脾脏细胞。

（3）由于大肠杆菌是原核生物，无内质网和高尔基体，无法分泌抗体，因此需对成功转化的大肠杆菌进行破碎处理，然后才能提纯得到目标抗体。

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化学试剂	生物材料
化学试剂	A鸡血细胞	B花生种子	C蛙皮肤细胞	D棉花纤维	E霉菌
甲基绿溶液	+	_	+	_	_
斐林试剂	_	_	_	_	_
苏丹Ⅲ溶液	_	+	_	_	_
双缩脲试剂	+	_	+	_	+

（“＋”表示有颜色反应； “-”表示无颜色反应）

请回答下列问题：

（1）A、C与甲基绿发生颜色反应，说明两种细胞内含有________________。

（2）B与苏丹Ⅲ的反应可以说明花生种子中含有________________。

（3）D与四种试剂都无颜色反应。若将E提取物与D材料混合，一段时间后混合液能与斐林试剂发生反应，生成砖红色沉淀，这种颜色反应说明E提取物中有水解棉花纤维的__________，从而混合液中有________________生成。

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C. 未煮熟的玉米胚有较浅的着色与纵切时部分细胞破损有关

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(2)成熟的瘦素分子由一条肽链盘曲折叠而成，链内有145个肽键，推测这条肽链是由________个氨基酸分子通过________形成的。

(3)脂肪是细胞内良好的________物质，但在饥饿时，机体会先调动糖原的分解，以更快供能。糖原与植物细胞中的________和________都属于多糖，组成它们的单体是________

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D. 若标本染色较深，用显微镜观察时可选用凹面反光镜或调大光圈

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