Question

12．图是利用正常大鼠制备转基因大鼠的流程示意图，回答下列问题．

（1）质粒是环状DNA分子，没有游离端．当质粒用限制酶切割一次以后，形成2或0个黏性末端，若在构建基因表达载体时，选用同种限制酶来切割目的基因和质粒，再用连接酶连接两者之间的黏性末端，则会出现部分转基因大鼠中目的基因不能正确表达的情况，其最可能的原因是同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因与质粒反向连接．
（2）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从处死的雌鼠卵巢中获取，采集到的精致必须经过获能处理后，才能与卵母细胞结合，完成受精作用．
（3）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植．

Answer 1

分析 分析题图：图示是利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程图．图中包括体外受精过程、采用转基因技术将目的基因导入受精卵的过程、早期胚胎发育过程以及胚胎移植过程．

解答 解：（1）质粒是环状DNA分子，没有游离端．当质粒用限制酶切割一次以后，如果形成的是黏性末端，有2个末端；如果形成的是平口末端，即0个黏性末端，若在构建基因表达载体时，选用同种限制酶来切割目的基因和质粒，同种限制酶切割形成的末端形同，部分目的基因与质粒在DNA连接酶的催化下反向连接，将会出现部分转基因大鼠中目的基因不能正确表达的情况．
（2）卵细胞一般可从雌鼠的输卵管或卵巢中获取．精子需要获能后才可以进行受精作用．
题图中的高血压相关基因作为目的基因，质粒作为载体，二者需用同种限制性核酸内切酶切割后才能连接成重组载体，该过程与质粒上有限制酶切割位点有关．
（3）当受体细胞为动物细胞时，一般选择受精卵，即图中体外受精形成的受精卵．再利用显微注射法将目的基因导入受体细胞，然后进行早期胚胎培养，再进行胚胎移植，生下转基因牛犊．
故答案为：
（1）2或0    同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因与质粒反向连接
（2）输卵管    获能
（3）体外受精

点评 本题考查了基因工程、胚胎工程的相关内容，意在考查考生理解所学知识的要点，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用．