Question

【题目】下图是某科研所以小鼠为材料制备某抗原的单克隆抗体及研究胚胎干细胞分化条件的流程图。请回答相关 问题：

（1）①过程需用__________处理以将组织分散成单个细胞。图中选用的A细胞一般是传代__________的细胞。图中去核卵母细胞是通过__________法去除卵母细胞中的核得到的。

（2）胚胎干细胞在形态上的特点是____________________。③过程需要向培养液中加入________，如牛磺酸、丁酰环腺苷酸等化学物质，从而诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。

（3）④过裎常用的生物诱导因素是__________________。④过程中产生的融合细胞的类型有_______（用YY细胞表述）。

（4）简述⑤过程中要进行哪两次筛选？_________________________________。

Answer 1

【答案】 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 10代以内 显微操作 体积小、细胞核大、核仁明显 分化诱导因子 灭活的病毒 X自身融合细胞、Y自身融合细胞、X—Y融合细胞 —次是通过具有筛选作用的培养基筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过抗原一抗体杂交筛选出能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞

【解析】动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖；取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养；单克隆抗体的制备过程：制备产生特异性抗体的B淋巴细胞→获得杂交瘤细胞→克隆化培养和抗体检测→将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖→提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。

详解（1）动物组织细胞之间含有多种胞外蛋白，如胶原蛋白，使细胞间或细胞与培养瓶内壁粘连起来，因此①过程需用胰蛋白酶分解这些蛋白质后就可以使组织细胞分散成单个细胞。核移植时选择的供核一方一般是传代10代以内细胞，原因是细胞能保持正常的二倍体核型（遗传物质不发生改变）。图中去核卵母细胞是通过显微操作法去除卵母细胞中的核得到的。

（2）胚胎干细胞具有胚胎细胞的特性，在形态上，表现为体积较小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物任何一种组织细胞。③过程是诱导细胞分化的过程，需要向培养液中加入分化诱导因子，如牛磺酸、丁酰环腺苷酸等化学物质，从而诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。

（3）④过裎为诱导细胞融合的过程，常用的生物诱导因素是灭活的病毒。④过程中产生的融合细胞的类型有X自身融合细胞、Y自身融合细胞、X—Y融合细胞。

（4）⑤过程是单克隆抗体的筛选过程，融合的结果是有很多不符合要求的；如有B淋巴细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞等，所以要进行两次筛选，—次是通过具有筛选作用的培养基筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过抗原一抗体杂交筛选出能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞。