Question

【题目】神经纤毛蛋白-1（NRP-1）能在肿瘤细胞内表达，是血管内皮生长因子家族成员的受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。研究人员从肿瘤细胞中扩增出NRP-1基因并将其导入大肠杆菌体内进行发酵培养，分离提纯相应NRP-1，并将其免疫小鼠，以制备抗NRP-1的单克隆抗体（NRP-1MAb）。分析回答下列回题：

（1）利用PCR技术可以从肿瘤细胞的基因组中分离扩增得到完整的NRP基因，其原因是__________。将扩增后的目的基因构建成表达载体后，导入用__________处理的大肠杆菌体内完成转化。

（2）研究人员将分离提纯的NRP-1免疫小鼠后，取其脾脏中B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上不能存活的是__________。选取检测抗体阳性的杂交瘤细胞进行体外培养时需要的气体环境是__________。

（3）为进一步确定NRP-1MAb靶向治疗时的用药方式，研究人员将直肠癌组织块制成单细胞悬液，等量注入4组裸鼠右前腋下，接种3后天开始向培养液中施加NRP-1MAb药物，每隔10天给药1次，共4次。给药后测算一次肿瘤体积，结果如下图所示：

分析上图可以得出的结论是__________。根据实验结果，请给出使用NRP-1MAb进行靶向治疗癌症时的临床建议：__________。

Answer 1

【答案】使用与NRP-1基因两端特异性结合的引物可以从模板DNA中扩增出该基因 Ca2+ 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞 95%的空气和5%的CO2 NRP-1MAb能有效的降低肿瘤的体积，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的更显著 使用中剂量给药

【解析】

1、利用PCR技术扩增目的基因时，由于DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链，因此要用两种引物才能确保DNA两条链同时被扩增；引物I延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列。

2、分析图可知，实验组与对照组比较，NRP-1MAb能有效的降低肿瘤的体积；低、中、高剂量组比较可知，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的更显著。

（1）由分析可知，使用与NRP-1基因两端特异性结合的引物，可以从模板DNA中扩增出处于两个引物之间的该基因。将目的基因导入大肠杆菌，最常用的转化方法是，用Ca2+处理细胞使其处于感受态。

（2）用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上不能存活的是B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B淋巴细胞与B淋巴细胞融合的细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合的细胞。进行动物细胞培养时，通常将培养基放置于95%的空气和5%的CO2的混合气体的培养箱中进行培养。

（3）由图示可以看出，与对照组比较，NRP-1MAb能有效的降低肿瘤的体积；低、中、高剂量组比较可知，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的更显著，因此使用NRP-1MAb进行靶向治疗癌症时采用中剂量给药，用药量少，效果明显。