Question

（15分）转基因生物可用于生产人类所需要的药用蛋白，如激素、抗体、疫苗、酶等。

图一是通过生物工程培育能产生人胰岛素烟草的过程。请据图回答：
（1）基因工程的核心步骤是______（填字母）。此过程所需的工具酶是                    
（2）下图二是运载体和反转录得到的胰岛素基因的片段，已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。GeneI和 GeneII为质粒上的标记基因，根据图分析, 应用限制酶          切割质粒，用限制酶        切割目的基因。构建的重组质粒中,除含有外源基因、标记基因外,还必须含有         和          。
（3）B过程中，常用_________处理使细菌成为感受态细胞，从而利于重组质粒的导入。
（4）如果从分子水平检测人胰岛素基因是否表达成功，可以采用                方法。

Answer 1

（1）A     限制酶和DNA连接酶
（2）I    Ⅱ（1分）   启动子    终止子
（3）Ca²⁺   （4）抗原-抗体杂交

解析试题分析：（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，为图一的A；此过程所需的工具酶是限制酶和DNA连接酶。
（2）根据图分析,应用限制酶I来切割质粒，这样只破坏GeneII，保留GeneI；如果用限制酶Ⅱ切割质粒，GeneII和GeneI都被破坏，基因表达载体就无标记基因。而胰岛素基因片断一端为限制酶I的识别序列—G↓GATCC－，一端为限制酶Ⅱ的识别序列－↓GATC－；如果用限制酶I来切割，只能切割一端，用限制酶Ⅱ切割，则两端都能切割，这样才能获取胰岛素基因。构建的重组质粒中,除含有外源基因、标记基因外,还必须含有启动子（基因转录信号）和终止子（转录终止信号）。
（3）图一B为基因表达载体导入土壤农杆菌过程，通常用Ca²⁺处理细菌，使之处于一种能吸收周围环境中的DNA的生理状态，即感受态细胞。
（4）如果从分子水平检测人胰岛素基因是否表达成功，可以从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体杂交，如果有杂交带出现，表明目的基因成功表达。
考点：本题考查基因工程相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系能力和识图能力。