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【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段长度bp即碱基对和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。请回答下列问题

1图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由___________连接。

2若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段,其产物长度为______________________。

3若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶Sma I完全切割,产物中共有___________种不同长度的DNA片段。

4若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是______________________。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加______________________的培养基进行培养。

【答案】1脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖

2523bp、724bp、643bp

34

4BamH I 抗生素B

【解析】

试题分析:(1一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接。

2限制酶Sma的酶切位点是CCCGGG,其切割产生的是平末端图1中DNA片段含有两个Sma酶切位点,被Sma酶完全切割后出现三个长度的片段,分别是537bp、790bp、661bp。

3杂合子的基因型为Dd,其中D基因片段有两个Sma酶切位点,完全切割后出现三个片段长度分别是537bp、790bp、661bp,发生基因突变后的d基因片段只有一个Sma酶切位点,完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp,所以从杂合子中分离的DNA片段被限制酶Sma完全切割后形成会四种不同的DNA片段

4基因表达载体构建的过程中需要利用限制酶和DNA连接酶限制酶Msp和Sma的切割位点位于目的基因D上,若用这两种酶切割会被破坏目的基因D;运载体的两个标记基因上都有限制酶Mbo的切割位点,用该酶切割会破坏这两个标记基因,因此只能选用限制酶BamH切割外源DNA分子和运载体用限制酶BamH切割质粒会破坏抗生素A抗性基因,但不会破坏抗生素B抗性基因,所以导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存,因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加抗生素B的培养基培养。

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