Question

【题目】（1）为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。

①获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图38-1中的__________处，DNA连接酶作用于__________处。（填“a”或“b”）

②将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和__________法。

③为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的耐盐基因做探针进行分子杂交检测，又要用__________方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。

（2）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图2、图3中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

限制酶	BamH Ⅰ	Hind Ⅲ	EcoR Ⅰ	Sma Ⅰ
识别序列 及切割位点	↓ GGATCC CCTAGG ↑	↓ AAGCTT TTCGAA ↑	↓ GAATTC CTTAAG ↑	↓ CCCGGG GGGCCC ↑

④一个图2所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有__________个游离的磷酸基团。

⑤用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是__________。

⑥重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了__________。

⑦构建重组质粒时，如果没有EcoRⅠ限制酶，则可以使用__________限制酶处理质粒、外源DNA。

Answer 1

【答案】a a 基因枪法（花粉管通道法） 一定浓度盐水浇灌（移植到盐碱地中） 0、2 Smal会破坏质粒的抗药性基因和外源DNA中的目的基因 筛选含有目的基因的细胞 BamHI和Hind Ⅲ

【解析】

分析图1：根据题意和图示分析可知：a处为磷酸二酯键，b处为氢键，限制酶作用于磷酸二酯键，而不是氢键；把表达载体导入受体细胞的方法对于动物、植物、细菌是不一样的，这里要区分清楚；最后一步在鉴定时可以用DNA分子杂交法，抗原抗体杂交法，还有特性验证试验法，最简单的就是移植到盐碱地中看是否具有抗性。

图2为质粒，在基因工程中常作载体，由图可知，质粒中有四个酶切割位点，其中SmaⅠ切割位点在标记基因中。
图3为含有目的基因的DNA分子片段，SmaⅠ切割位点位于目的基因中。
cDNA指mRNA反转录产生的多种互补DNA。

（1）①图中a表示磷酸二酯键，是限制酶的切割位点，也是DNA连接酶的连接位点；b表示氢键，是解旋酶的作用位点。
②将重组DNA分子导入植物细胞的常用方法有农杆菌转化法、基因枪法或花粉管通道法。

③要确定耐盐转基因水稻是否培育成功，从分子水平上，需要用放射性同位素标记的耐盐基因做探针进行分子杂交检测；从个体水平上，又要用一定浓度的盐水浇灌方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。

（2）④由图可知，质粒是环状的，切割前没有游离的磷酸基团，质粒中有一个SmaⅠ酶切割位点，所以切割后有两个游离的磷酸基团。

⑤由图可知，目的基因和标记基因中都有SmaⅠ酶切割序列，如用SmaⅠ酶会破坏质粒的抗药性基因和外源DNA中的目的基因。

⑥重组质粒中抗生素抗性基因是标记基因，作用是为了鉴别和筛选含有目的基因的细胞。

⑦构建重组质粒时，如果没有EcoRⅠ限制酶，则可以使用BamHI和Hind Ⅲ限制酶处理质粒、外源DNA。BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶切割产生的黏性末端不同，若用这两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，再用DNA连接酶连接两者时，还可避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化。