Question

13．豆浆是深受中国百姓喜爱的饮品，但易变质，保质期较短．科研人员对变质豆浆中的腐败细菌进行分离，并研究了乳酸链球菌素对腐败细菌的抑制效果，为生产豆浆时，优化保质方法提供依据．主要研究过程如下：
①豆浆变质处理将2种市售豆浆A、B和自制豆浆在无菌操作台上分别装入已灭菌的250mL三角瓶中，密封、37℃条件下，放置7d后，豆浆发生变质．
②腐败细菌的初步分离和计数取变质的豆浆在无菌条件下接种到细菌培养基上，培养一段时间后．统计各培养基上菌落种类和数量．结果如表：

细菌 序号	菌落特征	菌落直径/mm	菌落数/个
			豆浆A	豆浆B	自制豆浆
S1	表面有白色绒毛，圆形边缘不规则	5	5	3	7
S2	白色，表面无绒毛，有白色液滴	1～2	18	11	24
S3	黄色，表面无绒毛，如同黄色液斑	20-30	11	7	15

③比较乳酸链球菌素添加量对腐败细菌的抑制效果以自制的新鲜豆浆为材料，经相应处理后，在37℃下放置35d后，统计豆浆中腐败细菌数量，结果如图．
请回答下列问题：
（1）步骤①中三角瓶的常用灭菌方法是干热灭菌，步骤②中培养基的常用灭菌方法是高压蒸汽灭菌．
 （2）步骤②中适宜采用的接种方法是稀释涂布平板法．区分菌落种类的依据是菌落的形态、大小、隆起程度和颜色等特征．统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防因培养时间不足而导致遗漏菌落的种类和数目．
（3）乳酸链球菌素是一种天然食品防腐剂，它是由34个氨基酸组成的多肽．步骤③结果表明，最能耐受乳酸链球菌素的细菌是S₁为有效防止豆浆腐败，在生产中乳酸链球菌素的添加量应控制在250mg．kg^-1左右．
（4）与用抗生素防腐相比，使用乳酸链球菌素防腐的优点是食用后会被人体消化，不会改变人体肠道内正常菌群．

Answer 1

分析 1、实验室常用的灭菌方法
①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌；
②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；
③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min．
2、分析曲线图：图中看出，随着乳酸链球菌素的浓度的升高，S1细菌的数量相对值最高，S2其次；乳酸链球菌素浓度为250mg．kg^-1后，细菌的相对数量不再降低．

解答 解：（1）玻璃器皿一般采用干热灭菌，培养基常用高压蒸汽灭菌．
 （2）步骤②需要对“腐败细菌的初步分离和计数”，因此适宜采用稀释涂布平板法．区分菌落种类的依据是菌落的形态、大小、隆起程度和颜色等特征．统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防因培养时间不足而导致遗漏菌落的种类和数目．
（3）分析曲线图可知，随着乳酸链球菌素的浓度的升高，S1细菌的数量相对值最高，即表明最能耐受乳酸链球菌素的细菌是S₁．曲线图中看出，乳酸链球菌素浓度为250mg．kg^-1后，细菌的相对数量不再降低，即为有效防止豆浆腐败，在生产中乳酸链球菌素的添加量应控制在250mg．kg^-1左右．
（4）与用抗生素防腐相比，使用乳酸链球菌素防腐的优点是食用后会被人体消化，不会改变人体肠道内正常菌群．
故答案为：
（1）干热灭菌   高压蒸汽灭菌
（2）稀释涂布平板法     菌落的形态、大小、隆起程度和颜色等特征    因培养时间不足而导致遗漏菌落的种类和数目
（3）S1    250mg．kg^-1
（4）食用后会被人体消化，不会改变人体肠道内正常菌群

点评 本题考查微生物分离和培养的相关知识，要求考生能够掌握实验室常用的灭菌方法，识记平板划线法和稀释涂布平板法的不同应用，并能够结合曲线图中的相关信息准确答题．