Question

13．2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家．绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助 GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能．如图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

（1）过程①②中用到的工具酶是限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶．
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是显微注射法．
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因．获得的转基因克隆猪可以解决的医学难题是可以避免免疫排斥．
（4）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．重组质粒上除含有目的基因外还应具备启动子、终止子、标记基因等结构．
（5）基因的载体除图中的质粒外，还有动植物病毒、λ噬菌体的衍生物．
（6）检测受体细胞的染色体上是否插入目的基因的方法是DNA分子杂交技术．
（7）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是②①③④（用数字表示）．
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）
④表达出蓝色荧光蛋白．

Answer 1

分析 分析题图：图1为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，其中①表示获取目的基因（绿色．荧光蛋白基因）的过程；②表示基因表达载体的构建过程；③表示将目的基因导入受体细胞．此外还采用了核移植、早期胚胎培养、胚胎移植等技术．

解答 解：（1）①是获取目的基因的过程，该过程需要用到限制酶；②是基因表达载体的构建过程，该过程需要用到限制酶和DNA连接酶．中
（2）③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是显微注射法．
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因．获得的转基因克隆猪可以解决的医学难题是可以避免免疫排斥．
（4）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．基因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等．
（5）基因工程常用的载体有：质粒、动植物病毒、λ噬菌体的衍生物．
（6）检测受体细胞的染色体上是否插入目的基因的方法是DNA分子杂交技术．
（7）蛋白质工程的操作过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）→基因表达合成相应的蛋白质．因此采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：②①③④．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶
（2）显微注射法
（3）标记基因   免疫排斥
（4）基因表达载体的构建    启动子、终止子、标记基因
（5）动植物病毒  λ噬菌体的衍生物
（6）DNA分子杂交技术   
（7）②①③④

点评 本题结合我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，考查基因工程的原理及技术、核移植技术及胚胎工程技术，重点考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作过程，能准确判断图中各步骤的名称及采用的生物技术．