Question

【题目】蛋白质的提取和分离在分子生物学研究中具有重要意义。回答下列与蛋白质的提取和分离相关的问题：

（1）血红蛋白提取和分离一般分为四步，即样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。

①样品处理中红细胞的洗涤要用_________反复冲洗、离心，在洗涤红细胞时，离心速度过高和时间过长会使_________等一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是_________。

②在_________的作用下，洗涤好的红细胞破裂，释放出血红蛋白。

③粗分离过程中，透析的目的是_________。

（2）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液（pH为7．0）的目的是_________。

（3）在装填色谱柱时不得有气泡存在，因为_________。

Answer 1

【答案】生理盐水 白细胞 离心后上清液中不再呈现黄色 蒸馏水和甲苯 去除样品中分子量较小的杂质 准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内一致 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果

【解析】

蛋白质的提取和分离一般分为四步：

（1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白稀释；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。

（2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。

（3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。

（4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。

凝胶色谱法是根据分子量的大小分离蛋白质的方法之一。

（1）样品处理中红细胞的洗涤要用生理盐水反复冲洗、离心。洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白。达到该目的的关键是控制离心的速度和时间。白细胞和淋巴细胞中不含有血红蛋白，红细胞的洗涤过程中，离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是离心后上清液中不再呈现黄色。洗涤好的红细胞在蒸馏水和甲苯的作用下破裂，释放出血红蛋白。透析的目的是去除样品中分子量较小的杂质。

（2）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液（pH为7．0）的目的是准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内一致。

（3）在装填色谱柱时不得有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。