Question

16．α-抗胰蛋白酶是一种重要的药用蛋白，可在转基因母羊的乳汁中获得．流程如图：

（1）目的基因与表达载体用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．采集的精子需要经过获能（处理），才具备受精能力．
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是显微注射法．为了获得母羊，移植前需对巳成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．利用和胚胎移植技术可获得多个转基因个体．
（4）检测目的基因是否已转录出了mRNA，可采用分子杂交技术．若要检测羊乳汁中是否含α-抗胰蛋白酶，需用抗原-抗体杂交法，若有杂交带出现，表明目的基因已形成蛋白质产品．

Answer 1

分析 DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
该基因工程需要对羊的性别进行选择，由于只有母羊能够分泌乳汁，因此选择母羊的胚胎进行移植．

解答 解：（1）基因工程的工具酶包括限制酶和DNA连接酶，目的基因与表达载体用同种限制酶切割后，形成相同的黏性末端，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．采集的精子需要经过获能（处理），才具备受精能力．
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是显微注射法．为了获得母羊，移植前需对巳成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体．
（4）检测目的基因是否已转录出了mRNA，可采用分子杂交技术．若要检测羊乳汁中是否含α-抗胰蛋白酶，需用抗原-抗体杂交法，若有杂交带出现，表明目的基因已形成蛋白质产品．
故答案为：
（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）
（2）超数排卵获能（处理）
（3）显微注射法性别鉴定胚胎分割
（4）分子杂交抗原-抗体杂交

点评 本题考查了基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生能够识记基因工程的操作步骤；明确该基因工程中需要选择母羊进行胚胎移植；识记细胞全能性的概念等．要求考生具有扎实的基础知识，难度适中，属于考纲中识记、理解层次的考查．