Question

【题目】RT－PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术，具体过程如图所示：

(1)过程Ⅰ需要加入缓冲液、原料、_____________、_______________和引物A等。

(2)过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95 ℃，其目的是__________________、_______________。

(3)过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要_________个引物B。

(4)利用RT－PCR技术获取的目的基因_______________ (填“能”或“不能”)在物种之间交流；该技术还可用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度，原因是_______。

(5)RT－PCR过程中主要借助对__________的控制，影响酶的活性，从而使得化学反应有序高效地进行。

Answer 1

【答案】RNA提取物 逆转录酶 让逆转录酶变性失活 使mRNA－cDNA杂合双链解开 2n－1 能 增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度)，便于检测 温度

【解析】

对题图进行分析可知，过程Ⅰ以mRNA为模板合成cDNA的过程，表示逆转录。过程Ⅰ的产物是cDNA，cDNA与mRNA形成杂合双链。过程Ⅱ首先将mRNA－cDNA杂合双链解开，再以单链cDNA为模板合成双链DNA，最后利用PCR技术进行大量扩增。

(1)过程Ⅰ以mRNA为模板合成cDNA的过程，表示逆转录，需要加入缓冲液、原料、RNA提取物、逆转录酶和引物A等。

(2)过程Ⅰ以mRNA为模板合成cDNA，形成cDNA-mRNA杂合双链。因此，过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95 ℃，使mRNA－cDNA杂合双链解开，同时让逆转录酶变性失活。

(3)根据DNA分子半保留复制的特点，对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要2n-1个引物B。

(4)不同生物体内DNA分子的基本结构相同，且所有的生物共用一套密码子，因此利用RT－PCR技术获取的目的基因能在物种之间交流。利用该技术增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度)，便于检测。

(5)RT－PCR过程中主要借助对温度的控制，影响酶的活性，从而使得化学反应有序高效地进行。