Question

【题目】微生物强化采油（ME0R)是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。以下是人们筛选、纯化和扩大培养该类微生物的实验操作。请分析回答：

（1）土壤有“微生物的天然_______________”之称，该类微生物应取自________的土壤。

（2）用于筛选和纯化该类微生物的培养基从功能上讲属于____________培养基。对培养基进行灭菌，常用的方法是_________________________________。

（3）接种后，因为该生物是________微生物，所以需密封培养。培养一段时间后，在培养基上形成降油圈，此时选取降油圈__________的菌落作为最高效的目的菌株。

（4）扩大培养过程中需要对微生物进行计数，取0.2mL稀释度为104的稀释液涂布，用固体培养基对其培养，每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落____________时的记录作为结果，这样可以防止__________。最后统计的三个平板，菌落数分别是200、180、220，则样品中微生物的数量为_____________个/mL。该统计结果___________(低于/高于）实际值。这是因为________________。

Answer 1

【答案】 培养基 长期被石油污染（含石油多的） 选择 高压蒸汽灭菌 厌氧型 最大 数目稳定 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 1.0×107 低于 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

【解析】试题分析：在长期被石油污染的土壤中生存下来的微生物，能降解石油，应选用特定的选择培养基进行筛选和纯化该类微生物；常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，该类微生物是厌氧微生物，接种后应密封培养；培养一段时间后在培养基上可形成降油圈，降油圈越大，说明该处的微生物降解石油的能力越强，所以应选择降油圈大的菌落进行培养以获得高效菌株，计算微生物的数量应取三个平板的平均值，该值会低于实际值，因为看到的是菌落数目。

（1）在长期被石油污染的土壤中生存下来的微生物，能降解石油，所以土壤取样时，应从含石油多的土壤中采集。

（2）从功能上，应选用特定的选择培养基进行筛选和纯化该类微生物；对培养基进行灭菌，常用的方法是高压蒸汽灭菌法。

（3）该类微生物是厌氧微生物，接种后应密封培养；培养一段时间后在培养基上可形成降油圈，降油圈越大，说明该处的微生物降解石油的能力越强，所以应选择降油圈大的菌落进行培养以获得高效菌株。

（4）对微生物进行计数时，应选取菌落数目较稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。最后统计的三个平板微生物的数量，应取三个平板的平均值，即（200+180+220）÷3=200个；再计算每毫升培养液中微生物数量：200÷0.2×104=1.0×107个/mL，该结果会低于实际值，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。